冷凍保存領(lǐng)域隨著時(shí)間的推移而飛躍發(fā)展。冷凍解決方案已經(jīng)過優(yōu)化和優(yōu)化，新的開發(fā)成果使更長(zhǎng)的存儲(chǔ)時(shí)間和更好的恢復(fù)率成為可能。為了獲得最佳結(jié)果，以下是冷凍活細(xì)胞或組織時(shí)研究人員應(yīng)遵循的3個(gè)關(guān)鍵。

像歷史許多其他重大發(fā)現(xiàn)一樣，第一種冷凍保存介質(zhì)是偶然產(chǎn)生的。早在1948年，由Polge，Smith和Parkes組成的研究人員小組研究了家禽的精子，并希望保存一些樣本用于以后的實(shí)驗(yàn)。不確定如何發(fā)生，但他們沒有將樣品冷凍在隨后用于保存細(xì)胞的溶液中，而是將細(xì)胞放在貼標(biāo)簽的瓶中，該瓶中含有甘油，蛋白和水的混合物。而且這種新混合物遠(yuǎn)比預(yù)期的解決方案更好，因此誕生了冷凍保存領(lǐng)域。

從此，該領(lǐng)域得到了發(fā)展，解決方案已經(jīng)過改進(jìn)和調(diào)整?，F(xiàn)在可以在-20°C或-80°C的溫度下存儲(chǔ)活細(xì)胞和組織，而新的開發(fā)成果使更長(zhǎng)的存儲(chǔ)時(shí)間和更好的復(fù)蘇率成為可能。此外，還使用-液氮（以液態(tài)或蒸氣形式）在-196°C下進(jìn)行低溫保存，這已成為長(zhǎng)期保存的重要條件。

冷凍細(xì)胞的三大秘訣

處理冷凍保存的細(xì)胞有許多不同的方法，每種方法根據(jù)預(yù)期用途，保存時(shí)間范圍，冰箱的可用性等而有所不同。即使如此，所有冷凍保存方法都有一些共同點(diǎn)，研究人員應(yīng)遵循這些共同點(diǎn)以取得最佳結(jié)果。

1.使用適合細(xì)胞的凍存液

無論使用“自制”還是商業(yè)冷凍介質(zhì)，請(qǐng)務(wù)必使用適合您的細(xì)胞或組織的物質(zhì)。有時(shí)，可以在相關(guān)論文中找到針對(duì)特定細(xì)胞類型或應(yīng)用的優(yōu)化信息。通過篩選多種配方，您可以找到適合您特定細(xì)胞的最佳培養(yǎng)基。解凍后評(píng)估細(xì)胞的恢復(fù)，附著（如果適用）和增殖。大多數(shù)細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基是基于DMSO的（以不同的百分比表示），但也有基于甘油的溶液（通常用于細(xì)菌）。如果您有干細(xì)胞等敏感細(xì)胞，請(qǐng)考慮使用無動(dòng)物成分的明確培養(yǎng)基，例如Origen的CP-70CE 認(rèn)證 USP 級(jí)凍存液，讓您可以更好地控制細(xì)胞的周圍環(huán)境，并大大提高凍存和復(fù)蘇效率。

2.注意速度。

冷凍樣品時(shí)，重要的是要注意速度。一旦將冷凍培養(yǎng)基添加到細(xì)胞中，由于室溫下細(xì)胞在DMSO中的暴露量有限，因此應(yīng)盡可能快地工作。當(dāng)然，切記不要為了速度而犧牲無菌性和人身安全！另一方面，請(qǐng)勿將小瓶直接放在液氮中或放在冰箱的盒子中。使用“ 允許樣品以每分鐘1°C的速度冷卻的“冰霜”或類似的冷凍容器。放在-80°C的冰箱中過夜，然后將小瓶轉(zhuǎn)移到液氮中。

3選擇正確的存儲(chǔ)位置。

凍存管放在哪里？在液氮內(nèi)部還是在蒸氣層中？一些研究人員聲稱，氣相層中的存儲(chǔ)效果更好，表明兩相之間的溫差不大，氣相中存儲(chǔ)的細(xì)胞不會(huì)暴露于潛在的支原體污染，這種污染通過液氮很難消除。

總之，請(qǐng)記住，安全是至關(guān)重要的，因此請(qǐng)小心處理凍存管，采取適當(dāng)?shù)纳锇踩胧┨幚砝鋬雠囵B(yǎng)基。

貨號(hào)      產(chǎn)品描述

Cs25  CryoStore 25 EVA 凍存袋

CS25F CryoStore 25 EVA 凍存袋，F(xiàn)型管路

CP-70   USP級(jí)DMSO 二甲基亞砜

PL07-2G PermaLife 7ml 透氣性細(xì)胞培養(yǎng)袋

PL30-2G  PermaLife 30ml 透氣性細(xì)胞培養(yǎng)袋

PL70-2G  PermaLife 70ml 透氣性細(xì)胞培養(yǎng)袋

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