小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞操作說明

種屬：小鼠

組織來源：正常骨髓血組織

傳代比例：1:2傳代

培養(yǎng)基配置：基礎(chǔ)培養(yǎng)基500ml；生長添加劑5ml；胎牛血清50ml；雙抗5ml

簡介 骨髓間充質(zhì)干細胞是骨髓基質(zhì)干細胞，對骨髓中的造血干細胞（HSC）不僅有機械支持作用，還能分泌多種生長因子（如IL-6，IL-11，LIF，M-CSF及SCF等）來支持造血。骨髓間充質(zhì)干細胞(bone mesenchymal stem cells，BMSCs)具有多向分化潛能，能促進間充質(zhì)組織的再生，如：骨、軟骨、肌肉、韌帶、肌腱、脂肪及基質(zhì)等組織。在骨髓中，BMSCs占骨髓有核細胞總數(shù)的0.001%~0.1%，含量極低。而同時，由于組織工程需要大量的種子細胞，從嚙齒類動物骨髓分離BMSCs的技術(shù)上的難度限制了許多實驗的開展。體外分離培養(yǎng)純度高、活力強、生物特性均一的BMSCs對組織工程及細胞的體內(nèi)、體外實驗顯得至關(guān)重要。

形態(tài)：長梭形細胞樣，不規(guī)則細胞樣

生長特征：貼壁生長

細胞檢測：CD44免疫熒光染色為陽性免疫熒光鑒定，細胞純度可達90%以上，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

倍增時間：每周 2 至 3 次

換液頻率： 2-3天換液一次

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

凍存條件：凍存液：90%FBS，DMSO 10%, 或使用非程序凍存液：貨號H-W-50/100

產(chǎn)品使用：于科學研究，不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。

細胞接收處理流程：

1：觀察有無破損漏液情況，如有請拍照及時聯(lián)系客服。

2：酒精消毒培養(yǎng)瓶表面后顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)，觀察拍照后不用打開培養(yǎng)瓶蓋 放入培養(yǎng)箱靜止2-3小時穩(wěn)定 細胞狀態(tài)。

3：請按照細胞操作指南進行次傳代凍存處理。

4：產(chǎn)品隨貨會附帶細胞說明書、細胞培養(yǎng)操作指南、細胞鑒定、支原體檢測報告。

5：若產(chǎn)品有異?；蚱渌蓡?，可隨時聯(lián)系客服；轉(zhuǎn)至技術(shù)支持。

常溫細胞收貨當天處理方式

1.收到常溫細胞后，及時拍照記錄有無漏液/瓶身破損現(xiàn)象。

2. 鏡下觀察有無微生物污染現(xiàn)象，拍照記錄不同倍數(shù)鏡下細胞狀態(tài)和有無染菌現(xiàn)象， 方便后續(xù)售后處理。

3. 消毒后，更換贈送的培養(yǎng)液放置培養(yǎng)箱靜止2-3小時。如細胞有多數(shù)懸浮細胞需要離心收集重新接種止培養(yǎng)瓶。

4. 觀察細胞密度若超過 80%則可正常傳代處理(有的原代細胞不可傳代，請根據(jù)實際情況決定)，傳代推薦比例 1：2 到 1：3（按實際收貨細胞密度決定，若不確定 可聯(lián)系技術(shù)支持）；若細胞密度不到 80%則可繼續(xù)培養(yǎng)，注意擰松瓶蓋或更換透氣瓶蓋；懸浮細胞注意離心所有培養(yǎng)基以收集細胞。

5. 由于氣溫，運輸?shù)扔绊懺斐少N壁細胞漂浮的，請將細胞離心收集后在離心管中消化后進行傳代（參考附件），或及時聯(lián)系技術(shù)支持進行指導傳代。

貼壁細胞傳代：1.從培養(yǎng)容器中吸出用過的細胞培養(yǎng)基并丟棄；

2.從與貼壁細胞層相對的容器一側(cè)輕輕加入沖洗液以避免攪動細胞層，前后搖晃容器數(shù)次

3. 從培養(yǎng)容器中吸出沖洗液并丟棄，向培養(yǎng)瓶中加入預熱的胰酶；胰酶量應足以覆蓋細胞層 (T25為1ml)；

4.將培養(yǎng)容器在室溫下孵育約 2分鐘（請注意實際孵育時間根據(jù)所用細胞系不同而有所差異）；

5.在顯微鏡下觀察細胞解離情況；如果解離程度未達 90%，可將孵育時間延長幾分鐘，每 30 秒鐘檢查一次解離情況；

6.細胞解離程度大于等于 90%時，傾斜培養(yǎng)容器，使細胞上液體盡快流盡；加入所用解離劑兩倍體積的預熱生長培養(yǎng)基；吹打細胞層表面數(shù)次，使培養(yǎng)基分散；

7.將細胞轉(zhuǎn)移到15mL 無菌離心管中，以 200×g 的離心力離心 3-5 分鐘 （請注意離心速度和時間依細胞種類不同而有所差異）；

8.用最少體積的預熱生長培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將細胞懸液按照推薦比例稀釋，并將適量體積的細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的細胞培養(yǎng)容器中，把細胞放回培養(yǎng)箱（注：如果使用培養(yǎng)瓶，將其放入培養(yǎng)箱前應將瓶蓋旋松，以便進行充分的氣體交換，除非您使用的是通氣式培養(yǎng)瓶和透氣性瓶蓋）。

懸浮細胞傳代：將 T25 培養(yǎng)瓶中的懸液收集至離心管中 1000rpm 離心 5min，收集上清，加 1-2ml 培養(yǎng)基重懸，按 1:2 比例進行比例傳代分到新T25瓶中，補充5-8ml/瓶新的培養(yǎng)基 ，最后放入細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。