成骨細(xì)胞礦化結(jié)節(jié)染色液（四環(huán)素法）

產(chǎn)品貨號(hào)：R23249

產(chǎn)品規(guī)格：3×10ml/3×50ml

產(chǎn)品簡介：

骨代謝是破骨細(xì)胞骨吸收與成骨細(xì)胞骨形成的動(dòng)態(tài)平衡過程。成骨細(xì)胞負(fù)責(zé)骨基質(zhì)的合成、分泌、礦化，是骨重建激活或終止的控制者，它在骨組織的創(chuàng)傷修復(fù)、骨組織的生長發(fā)育、骨量平衡中起著重要作用，是骨質(zhì)疏松、骨折等骨病研究的主要焦點(diǎn)。成骨細(xì)胞分化是其主導(dǎo)骨形成的前提與基礎(chǔ)。

成骨細(xì)胞礦化結(jié)節(jié)染色常用方法有四環(huán)素法和茜素紅S法，四環(huán)素染色法是利用四環(huán)素與礦化結(jié)節(jié)中的鈣鹽形成熒光的磷酸復(fù)合物，可用熒光顯微鏡觀察。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1. 磷酸緩沖鹽溶液(1×PBS,無鈣鎂)?

2. 培養(yǎng)基

3. 蒸餾水

4. 熒光顯微鏡

操作步驟(僅供參考)：

1. 成骨細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)，胰酶消化，接種培養(yǎng)于6孔板中，每孔有1×10⁵個(gè)細(xì)胞。

2. 培養(yǎng)基中添加1%-2%四環(huán)素溶液，細(xì)胞連續(xù)觀察、換液，培養(yǎng)14天。

3. 小心吸除培養(yǎng)液，磷酸緩沖鹽溶液(1×PBS)洗滌2次。

4. 加入足量Ob固定液固定。

5. 磷酸緩沖鹽溶液(1×PBS)洗滌2次,每次3min。

6. 加入DAPI染色液染色。

7. 輕輕吸除染色液,用磷酸緩沖鹽溶液(1×PBS)洗滌2次,每次3min。

8. 直接在熒光顯微鏡快速觀察，或抗熒光封片劑封片后再觀察。

染色結(jié)果：

鈣結(jié)節(jié)    粉紅色

注意事項(xiàng)：

1. 四環(huán)素溶液為無菌溶液，可以一次性分裝小份保存，注意避免染菌；使用時(shí)常溫溶解后與培養(yǎng)基按1:100比例混合后使用。?

2. Ob固定液宜揮發(fā)，開啟后應(yīng)密封保存。?

3. DAPI染色后應(yīng)盡快觀察，以免熒光消失，影響觀察。也可以用抗熒光淬滅封片劑處理。?

4. DAPI不宜反復(fù)凍融，否則容易失效。且對(duì)人體有一定刺激性，請注意做好防護(hù)。?

5. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期： 6個(gè)月有效。