在分子克隆領(lǐng)域，每一次技術(shù)革新都推動(dòng)著生命科學(xué)研究的邊界。如今，義翹神州基于經(jīng)典的Gateway®技術(shù)，成功攻克了傳統(tǒng)酶產(chǎn)品穩(wěn)定性不佳的行業(yè)難題，隆重推出ClickWay整合酶系列產(chǎn)品。我們以更高的性價(jià)比、穩(wěn)定性與簡(jiǎn)化的操作流程，為您開(kāi)啟載體構(gòu)建如“搭積木”般簡(jiǎn)單高效的新篇章。

01告別傳統(tǒng)瓶頸：為何選擇整合酶技術(shù)？

分子克隆的核心在于體外載體構(gòu)建。傳統(tǒng)方法主要依賴“切割-重連”路徑，包括限制性內(nèi)切酶-連接酶法和同源重組法。這些技術(shù)雖經(jīng)典，卻常伴隨諸多困擾：

· 流程繁瑣：需設(shè)計(jì)含酶切位點(diǎn)的特異引物，經(jīng)歷酶切、片段回收、連接等多步操作。

· 效率與精度難兼得：易受酶不完-全、連接效率低、組裝方向錯(cuò)誤等問(wèn)題影響。

· 通量限制：繁瑣的操作，使得難以在高通量應(yīng)用領(lǐng)域?qū)崿F(xiàn)效率與準(zhǔn)確兼顧。

· 隱性成本高：PCR及酶切連接可能引入突變，必須通過(guò)測(cè)序驗(yàn)證，增加時(shí)間和資金成本。

而以λ噬菌體整合酶為核心的重組酶技術(shù)，通過(guò)特異性識(shí)別序列（att位點(diǎn)）直接實(shí)現(xiàn)DNA片段的“無(wú)錯(cuò)”置換，從根本上規(guī)避了上述問(wèn)題。由此發(fā)展出的Gateway®技術(shù)，已成為高通量、模塊化載體構(gòu)建的金標(biāo)準(zhǔn)。

02 ClickWay核心技術(shù)優(yōu)勢(shì)：更穩(wěn)、更快、更準(zhǔn)

ClickWay整合酶不僅繼承了Gateway®技術(shù)的所有精髓，更在穩(wěn)定性上實(shí)現(xiàn)了突破。

2.1 “無(wú)錯(cuò)”克隆，結(jié)果可靠 —— 測(cè)序確認(rèn)？可能不再需要！

傳統(tǒng)方法中，切割與連接步驟分離是引入錯(cuò)配的根源。ClickWay使用的整合酶在結(jié)合特異性att位點(diǎn)后，于同一催化中心內(nèi)同步完成切割與重連，實(shí)現(xiàn)了“無(wú)錯(cuò)”連接，極大降低了突變風(fēng)險(xiǎn)，節(jié)省了寶貴的測(cè)序驗(yàn)證成本。

整合酶反應(yīng)（LR反應(yīng)）示意圖（源自義翹神州講座課件）

2.2 高靈敏度，勝任挑戰(zhàn) —— 大分子量/復(fù)雜載體構(gòu)建的福音

面對(duì)大分子量或低濃度載體構(gòu)建時(shí)，傳統(tǒng)方法效率驟降。ClickWay整合酶對(duì)att位點(diǎn)識(shí)別具有超高靈敏度，可催化極低濃度的片段發(fā)生高效重組，顯著提升大載體或復(fù)雜載體（如用于合成生物學(xué)、植物轉(zhuǎn)化的載體）的構(gòu)建成功率。在分子建庫(kù)領(lǐng)域，Gateway®技術(shù)的庫(kù)容量和基因豐度較傳統(tǒng)SMART技術(shù)具有明顯優(yōu)勢(shì)。

2.3 操作極簡(jiǎn)，一步到位 —— 本可游刃有余，何必匆匆忙忙

告別多步操作。使用ClickWay技術(shù)，僅需將酶與底物質(zhì)?；旌?，室溫孵育1-4小時(shí)即可完成反應(yīng)。在設(shè)計(jì)端，也僅需為標(biāo)準(zhǔn)att位點(diǎn)設(shè)計(jì)通用引物，無(wú)需為每個(gè)項(xiàng)目反復(fù)設(shè)計(jì)和驗(yàn)證特異性酶切位點(diǎn)引物，大幅提升效率。通過(guò)通用的一步LR反應(yīng)，ClickWay系統(tǒng)可以將目標(biāo)基因構(gòu)建到不同的骨架載體上，獲得具有不同標(biāo)簽?zāi)K、調(diào)控模塊或其他功能模塊的載體，實(shí)現(xiàn)對(duì)載體功能片段或重組蛋白策略的高效篩選。

與傳統(tǒng)Gateway®技術(shù)酶相比，ClickWay系統(tǒng)進(jìn)行了全面的穩(wěn)定性升級(jí)，解決了傳統(tǒng)酶產(chǎn)品易失活的問(wèn)題，讓Gateway®整合變得更加游刃有余。

ClickWay整合酶工作流程示意圖（源自義翹神州講座課件）

2.4 模塊化“搭積木” —— 多片段拼搭快速鎖定

通過(guò)精心設(shè)計(jì)的BP反應(yīng)（構(gòu)建入門(mén)克隆）和LR反應(yīng)（將目的基因轉(zhuǎn)移至表達(dá)載體），ClickWay系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)了模塊化載體構(gòu)建。尤其是高活性的LR酶，可支持多達(dá)五個(gè)片段的高效、有序一步組裝，讓構(gòu)建CRISPR載體、多基因表達(dá)載體、表達(dá)/調(diào)控元件組合篩選和基因組規(guī)模的功能研究等復(fù)雜任務(wù)變得簡(jiǎn)單和輕松。

03 ClickWayvs.同源重組克?。盒阅苋娉?/span>

04 黃金應(yīng)用場(chǎng)景

ClickWay整合酶系統(tǒng)是以下場(chǎng)景的理想選擇：

4.1 文庫(kù)構(gòu)建

ClickWay整合酶已經(jīng)成功應(yīng)用于cDNA文庫(kù)構(gòu)建等工業(yè)領(lǐng)域，客戶使用結(jié)果表明， ClickWay酶解決了傳統(tǒng)Gateway®酶穩(wěn)定性和貨期問(wèn)題，較傳統(tǒng)SMART方法具有高庫(kù)容量、長(zhǎng)片段擴(kuò)增和低偏好性的優(yōu)勢(shì)。

4.2 重組蛋白表達(dá)策略篩選

純化標(biāo)簽、信號(hào)肽、促融標(biāo)簽、調(diào)控因子等重組蛋白的高效表征策略篩選是一個(gè)費(fèi)時(shí)費(fèi)事的工作，高效的蛋白表達(dá)策略對(duì)于下游蛋白研究至關(guān)重要，對(duì)于一些難表達(dá)蛋白需要進(jìn)行大量的策略篩選。ClickWay系統(tǒng)可以用一步標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)同時(shí)構(gòu)建不同的表達(dá)載體，而不需要繁瑣的引物設(shè)計(jì)、PCR和基因回收操作。

義翹神州將多年重組蛋白開(kāi)發(fā)成功經(jīng)驗(yàn)與Gateway®技術(shù)融合，成功開(kāi)發(fā)了EcHiYi細(xì)菌表達(dá)載體庫(kù)與重組蛋白表達(dá)服務(wù)，依托高效ClickWay整合酶系統(tǒng)，48小時(shí)完成從目標(biāo)基因到百余種構(gòu)建策略篩選確認(rèn)試驗(yàn)，高效解決了包括多種核酸酶、蛋白酶和細(xì)胞因子在內(nèi)的，來(lái)源于不同動(dòng)物、植物或其他真核生物的難表達(dá)蛋白在大腸桿菌中高效高活性表達(dá)，部分產(chǎn)品已進(jìn)入產(chǎn)業(yè)化。

4.3 基因功能研究

組織定位、時(shí)間定位、敲除、過(guò)表達(dá)、互作研究、多基因敲除等基因功能研究往往需要不同的試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行交叉驗(yàn)證，穩(wěn)定高效的ClickWay系統(tǒng)可以提供“一步到位”的載體構(gòu)建過(guò)程，避免繁瑣的分子操作，顯著提升研究效率。目前ClickWay系統(tǒng)作為多片段組裝方法，在功能載體構(gòu)建領(lǐng)域大量成功應(yīng)用，顯著提升了下游客戶的研發(fā)效率。

4.4 交叉學(xué)科或分子“小白”

對(duì)于不熟悉分子操作的老師和同學(xué)，分子構(gòu)建學(xué)習(xí)與成功應(yīng)用成本巨大。ClickWay系統(tǒng)簡(jiǎn)單易上手，降低分子試驗(yàn)門(mén)檻，對(duì)于交叉學(xué)科老師、同學(xué)或其他分子試驗(yàn)“小白”十分友好。

?義翹神州ClickWay整合酶

義翹神州ClickWay整合酶系列，包括BP克隆試劑盒（貨號(hào)：SBBP01）和LR克隆試劑盒（貨號(hào)：SBLR01）。整合酶以穩(wěn)定性（長(zhǎng)期保存活性無(wú)顯著損失）、革命性的簡(jiǎn)便性和突出的性價(jià)比，重新定義了高效分子克隆。它不僅是技術(shù)的繼承，更是體驗(yàn)的飛躍，旨在讓每一位科研工作者都能更輕松、更自信地駕馭載體構(gòu)建，專注于科學(xué)發(fā)現(xiàn)本身。

注：Gateway®是Thermo Fisher Scientific Inc的產(chǎn)品注冊(cè)商標(biāo)

免責(zé)聲明：義翹神州內(nèi)容團(tuán)隊(duì)僅是分享和解讀公開(kāi)的研究論文及其發(fā)現(xiàn)，專注于介紹生物醫(yī)藥研究新進(jìn)展。本文僅作信息交流用，文中觀點(diǎn)不代表義翹神州立場(chǎng)。隨著對(duì)疾病機(jī)制研究的深入，新的實(shí)驗(yàn)結(jié)果或結(jié)論可能會(huì)修改文中的描述，還請(qǐng)大家理解。

本文不屬于治療方案推薦，如需獲得治療方案指導(dǎo)，請(qǐng)前往正規(guī)醫(yī)院就診。