中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會(huì)2017年5月發(fā)布的團(tuán)標(biāo)T/CALAS 22—2017 《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 小鼠諾如病毒檢測(cè)方法》描述了小鼠諾如病毒的檢測(cè)方法。標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了小鼠諾如病毒(MNV)的檢測(cè)方法、試劑等本標(biāo)準(zhǔn)適用于小鼠諾如病毒的檢測(cè)。其中方法上包括ELISA、普通PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR等方法。

小鼠諾如病毒 ( Murine Norovirus, MNV )生物學(xué)特點(diǎn)

GB14922—2022 《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 微生物、寄生蟲(chóng)學(xué)等級(jí)及監(jiān)測(cè)》中規(guī)定的免疫缺陷鼠中必須排除的病毒。小鼠諾如病毒 ( Murine Norovirus,  MNV ) 也是目前實(shí)驗(yàn)小鼠中感染率較高的一種病毒，有些實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施的感染率非常高。MNV會(huì)激活免疫系統(tǒng)，影響抗體檢測(cè)。小鼠諾如病毒是國(guó)標(biāo)中免疫缺陷小鼠的必檢項(xiàng)目。

小鼠諾如病毒屬于杯狀病毒科 諾如病毒屬，與人源諾如病毒的生物學(xué)及遺傳相似。2003年該病毒從小鼠中發(fā)現(xiàn)，后來(lái)受到越來(lái)越多的關(guān)注，關(guān)于諾如病毒感染的研究也逐步受到重視。鼠的MNV能通過(guò)接種細(xì)胞進(jìn)行增殖，但是人類(lèi)的諾如病毒不能通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)增殖。MNV基因組長(zhǎng)約7.5kb，為正義單鏈RNA。

小鼠諾如病毒 ( Murine Norovirus, MNV )感染后的影響

大部分實(shí)驗(yàn)小鼠對(duì)此病毒易感，雖然普通小鼠受感染無(wú)明顯發(fā)病癥狀，但可出現(xiàn)短暫、輕度的生長(zhǎng)遲緩。但是實(shí)驗(yàn)小鼠感染了MNV可能對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生一定影響或偏倚，輕則食欲，也可能影響繁殖，特別是免疫缺陷的小鼠感染后可能會(huì)導(dǎo)致小鼠死亡。而且可出現(xiàn)按持續(xù)性感染，持續(xù)數(shù)月，通過(guò)糞便排毒，引起大范圍感染。

感染后可影響免疫能力，破壞免疫及代謝研究結(jié)果，通過(guò)影響基因表達(dá)等因素影響藥效、毒理評(píng)估等。

小鼠諾如病毒 ( Murine Norovirus, MNV )的檢測(cè)方法

傳統(tǒng)的病毒檢測(cè)用 ELISA 的方法檢測(cè)病毒抗體，但是由于 ELISA 的方法容易出現(xiàn)抗體交叉反應(yīng)導(dǎo)致出現(xiàn)假陽(yáng)性，并且對(duì)于免疫缺陷小鼠來(lái)說(shuō)無(wú)法產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，所以需要有新的檢測(cè)方法來(lái)完成病毒的檢測(cè)。并且核酸病毒的增殖比抗體出現(xiàn)的時(shí)間更早，更易于早發(fā)現(xiàn)、早處理。

翼和生物開(kāi)發(fā)了小鼠諾如病毒的qPCR熒光定量檢測(cè)試劑盒，該試劑盒中HEX通道可鑒定樣本是否感染了小鼠諾如病毒MNV。檢測(cè)流程：一般采集糞便或者其他樣本，用翼和DNA/RNA共提取試劑盒提取諾如病毒RNA，提取好的核酸直接取樣5微升進(jìn)行上樣檢測(cè)。PCR檢測(cè)過(guò)程中需要設(shè)置陰性對(duì)照NTC和陽(yáng)性MNV對(duì)照，確保檢測(cè)的流程沒(méi)有出現(xiàn)假陽(yáng)性和假陰性。因?yàn)橐砗偷奶崛≡噭┖兄泻袃?nèi)參質(zhì)控品（外源基因組），可以質(zhì)控整個(gè)提取過(guò)程，所以在最終的檢測(cè)數(shù)據(jù)中CY5通道可以看到擴(kuò)增曲線。

該試劑盒靈敏度高，特異性強(qiáng)，成本降低，操作簡(jiǎn)單。