WB(Western blot)與凝膠成像系統(tǒng)怎么選?賽默飛 iBright——多功能成像系統(tǒng)
在分子生物學和醫(yī)學研究中,Western blot(蛋白質印跡)和凝膠成像是最常見的分析手段。隨著科研需求的增加,研究人員越來越傾向選擇操作簡便、結果可靠且符合合規(guī)要求的成像系統(tǒng)。作為科學服務品牌,本文聚焦于 Invitrogen iBright 成像系統(tǒng),解釋它為何能成為實驗室從“能用”到“好用”的升級之選。
一臺設備覆蓋核心與進階應用:從“凝膠成像系統(tǒng)”到“多功能成像系統(tǒng)”
iBright 提供多達 五種成像模式,涵蓋蛋白凝膠、核酸凝膠、化學發(fā)光 Western blot、熒光 Western blot,以及可混合信號的 Universal 模式;每次采集會自動記錄可見圖像,便于分子量等后續(xù)分析。這意味著它既是凝膠成像系統(tǒng),也是化學發(fā)光成像儀/WB 化學發(fā)光成像儀與熒光平臺的多功能成像系統(tǒng),顯著提升設備利用率。
圖像模式 | 可捕獲哪種信號? |
蛋白預制膠 | 凝膠(例如,考馬斯亮藍染色、銀染)和膜(例如,麗春紅、Thermo Scientific Pierce Reversible Protein Stain)的比色染色,凝膠的熒光染色(例如,Invitrogen SYPRO Ruby 染色) |
核酸凝膠 | 溴化乙錠和 Invitrogen SYBR 染色 |
化學發(fā)光 Western Blot | 使用各種常用 HRP 和 AP 底物(如 Thermo Scientific SuperSignal 和 Invitrogen WesternBreeze 底物)的化學發(fā)光印跡? |
熒光印跡 | 使用常用 RGB(可見光范圍)和近紅外熒光基團(如 Invitrogen Alexa Fluor 和 Alexa Fluor Plus 偶聯(lián)物)進行熒光染色 |
通用 | 自定義模式,用于對包含多種信號的樣品進行成像,例如化學發(fā)光、熒光、比色染色和/或可見圖像;圖像顯示類似于熒光印跡模式,允許為任意樣品添加偽彩色 |
*的攝影成像功能保證 “可發(fā)表級”圖像
· 9.1 MP 冷卻 CCD 相機,在默認與可調 binning 設置下兼顧分辨率、靈敏度與成像速度,適合不同場景的數(shù)據(jù)采集。
· Smart Exposure™ 自動曝光能快速給出各通道曝光,降低過曝/欠曝風險;熒光多通道會分別優(yōu)化曝光時間,減少通道間的妥協(xié)。
· Smart Range™ HDR 將一長一短兩張曝光合成為 16-bit HDR 圖像,把中高豐度與低豐度條帶同時拉進線性范圍,實測可將檢測范圍從約 2.5 個數(shù)量級擴展到約 3 個數(shù)量級,更利于 WB 定量與復現(xiàn)。
(圖1:檢測范圍從2.5數(shù)量級擴展至3個數(shù)量級)
這些特性針對 WB 化學發(fā)光成像的痛點而生,讓“看得清、量得準”成為常態(tài)。
省時高效:直觀交互與“機械級”對齊
12.1 英寸電容觸控屏配合一致的工作流,降低學習成本;自動變焦與自動對焦會根據(jù)樣品大小自動放大至合適視野(22.5×18.0 cm 視野,最高 8×),CL1500/FL1500 采用機械變焦以提升靈敏度。
更關鍵的是,CL1500/FL1500 支持 ±10° 機械式自動旋轉:與“數(shù)字旋轉”不同,機械旋轉不會引入像素鋸齒,條帶邊緣更平滑,數(shù)據(jù)完整性更好。
多重熒光:一次上膜,回答更多生物學問題
iBright FL1500 提供 5 組激發(fā)/發(fā)射通道,一次實驗可進行最多四色熒光多重;列舉了 AKT/GSK-3 通路等多靶標檢測實例,適合通路研究與近紅外(NIR)應用。濾光片范圍與兼容染料在手冊中給出,便于方法學設計與復現(xiàn)實驗條件。熒光通道的曝光由 Smart Exposure 分別優(yōu)化,降低多重妥協(xié)的代價。
(圖2:大視野(22.5 x 18.0 cm)最多可采集 4 塊小型印跡膜或凝膠。)
圖像拍攝即分析:從儀器到軟件的一體化體驗
iBright Analysis Software 提供桌面版(Windows/macOS)、云端版(Thermo Fisher Connect)與 Secure 安全版;支持圖庫管理、自動識別泳道/條帶、分子量估算、密度學與歸一化,批量導出 PDF 報告與 Excel 原始數(shù)據(jù)。對 4 張 mini 膜/膠可一次自動分析,減少重復勞動與主觀差異。
合規(guī)支持
賽默飛提供 SAE(Security, Auditing, E-signature) 方案以支持 21 CFR Part 11:賬戶與權限、密碼策略、審計日志與電子簽名均可在 SAE 管理控制臺中集中配置;配合 iBright Analysis Software—Secure 與儀器固件的 SAE 模式,形成流程級合規(guī)支持(提示:合規(guī)既含技術也含流程,仍需實驗室 SOP 配合)。
蛋白歸一化工作流程
為了消除不均一的蛋白樣品濃度、不一致的凝膠上樣量以及從凝膠到膜的不均勻轉印所帶來的樣品變異,通常會通過比較目標蛋白與 GAPDH、β-tubulin、β-actin 等內部管家蛋白對照,進行一個歸一化步驟。盡管管家蛋白過去一直是歸一化的,但比較目標蛋白與總泳道蛋白的策略可成為更準確的歸一化方法。
iBright 成像系統(tǒng)和 iBright 分析軟件提供多種定量和歸一化選項,補償實驗或樣品的變異,從而讓您找到實驗方法。
安全與可持續(xù):用綠色 LED 替代 UV
iBright 成像系統(tǒng)采用綠色 LED 透射光源,可有效激發(fā)溴化乙錠和 SYBR Green 染料等常用 DNA 染料,同時具有更多優(yōu)點。
· 不使用有害的紫外線:盡管紫外光可有效激發(fā)許多熒光染料和染色劑,但紫外線會危害健康。此外,長時間暴露于紫外光可能會損傷 DNA 樣本,并影響用于下游應用(如亞克?。┑臉悠吠暾?。
· 無汞廢物: 紫外透射燈可能含有有害物質汞,因此在處理和處置時需要特別小心。
· 更長的使用壽命: LED 燈珠的實際使用壽命比紫外燈管長更長,因此,在儀器的使用壽命內可以節(jié)省大量成本。
服務與支持
全系附帶 SmartStart 培訓(CL1500/FL1500 現(xiàn)場培訓,CL750 提供數(shù)字培訓),并提供 質保與延保服務、AB Assurance Plan、IQ/OQ 等,幫助維持高開機率與合規(guī)文檔完備。手冊末頁給出了型號對比與訂購信息,便于按需選型與后續(xù)擴展。
與常見替代方案的差異
· 自動化與線性范圍:Smart Exposure + Smart Range HDR 讓 WB 化學發(fā)光的線性范圍更寬;一些入門方案更依賴人工試錯,重復性不易保障。
· 數(shù)據(jù)完整性:機械旋轉避免數(shù)字旋轉的像素鋸齒,條帶更平滑;市面上多數(shù)僅提供數(shù)字旋轉或需手工重放樣品。
· 多重熒光能力:FL1500 提供 5 通道、4色多重;解決了部分WB成像平臺通道數(shù)少、更換濾片或近紅外支持受限,方法學遷移成本更高。
· 合規(guī)方案:原生的 21 CFR Part 11 支持(賬戶/審計/電子簽名)減少外接或自建系統(tǒng)的不確定性。
· 安全環(huán)保:綠色 LED 替代 UV,降低對人員與樣品的潛在傷害與環(huán)保負擔。
以上差異點用于說明 iBright 的優(yōu)勢取向,具體對比仍需以各廠商公開規(guī)格與實驗室既有流程為準。
結論:功能*易操作的 WB 與凝膠成像
如果你的目標是:化學發(fā)光 Western blot 的高動態(tài)范圍與定量可靠性、熒光多重的一致復現(xiàn)、從數(shù)據(jù)到合規(guī)的一體化、以及更安全可持續(xù)的日常操作,那么 iBright 成像系統(tǒng)提供的硬件、算法、軟件與服務組合,能在科研真實場景中落到實處。這也是為什么越來越多團隊把 iBright 作為從凝膠成像系統(tǒng)到多功能成像系統(tǒng)的升級之選,并把它用作日常的 WB 化學發(fā)光成像儀。
如果您對產品感興趣,希望咨詢或試用,請訪問賽默飛
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