產(chǎn)品概述

本品為艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源多克隆抗體（貨號(hào)：A302-173A），特異性靶向人源Cul5蛋白（Cullin-5，又稱VACM-1）。該抗體經(jīng)抗原親和純化，以完整IgG形式提供，適用于免疫組織化學(xué)（IHC）、免疫沉淀（IP）和蛋白質(zhì)印跡（WB）實(shí)驗(yàn)，可識(shí)別小鼠及人類樣本中的Cul5蛋白。免疫原設(shè)計(jì)靶向Cul5蛋白N端第1-50位氨基酸區(qū)域，能夠高效識(shí)別天然構(gòu)象及變性狀態(tài)下的目標(biāo)蛋白。

靶點(diǎn)背景：Cul5與E3泛素連接酶復(fù)合物

Cullin-5（Cul5）是Cullin家族成員之一，作為多種E3泛素連接酶復(fù)合物的核心骨架蛋白，在泛素-蛋白酶體系統(tǒng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。

結(jié)構(gòu)與功能特征：

作為支架蛋白，同時(shí)招募底物識(shí)別模塊（如SOCS盒蛋白）和E2泛素結(jié)合酶

參與形成Cullin-RING E3連接酶（CRL）復(fù)合物，介導(dǎo)底物蛋白的泛素化修飾

通過(guò)泛素化途徑調(diào)控多種信號(hào)分子和轉(zhuǎn)錄因子的穩(wěn)定性

別名與歷史：

Cul5也被稱為VACM-1（加壓素激活的鈣動(dòng)員受體1），最初作為加壓素受體信號(hào)通路的調(diào)節(jié)因子被發(fā)現(xiàn)。后續(xù)研究證實(shí)其核心功能為E3連接酶骨架蛋白。

組織與功能意義：

Cul5在多種組織中廣泛表達(dá)，參與細(xì)胞周期調(diào)控、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、病毒感染限制（如HIV-1 Vif蛋白劫持Cul5介導(dǎo)APOBEC3降解）以及神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)等生物學(xué)過(guò)程。

抗體特性規(guī)格

參數(shù) 規(guī)格

靶點(diǎn) Cul5 (Cullin-5)

宿主 兔

克隆性 多克隆

形式 完整IgG

同種型 IgG

偶聯(lián)物 非偶聯(lián)

純度 抗原親和純化

濃度 200 µg/ml

抗原物種 人

反應(yīng)性 小鼠、人

儲(chǔ)存與穩(wěn)定性

儲(chǔ)存溫度：2-8°C（請(qǐng)勿冷凍）

有效期：自收貨之日起1年

緩沖液：Tris緩沖鹽水，含0.1% BSA及0.09%疊氮鈉

> 注意：疊氮鈉作為防腐劑，如需進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)或體內(nèi)注射，應(yīng)通過(guò)透析或超濾去除。BSA作為穩(wěn)定劑，不影響多數(shù)免疫檢測(cè)。

應(yīng)用方法與實(shí)驗(yàn)條件

蛋白質(zhì)印跡（WB）

推薦稀釋度：1:2000 - 1:10,000

通用流程要點(diǎn)：

封閉液及抗體稀釋液：5% Milk-TBST

一抗孵育：過(guò)夜（4°C搖床）

洗滌：TBST緩沖液，每次5-10分鐘，共3次

二抗選擇：

細(xì)胞裂解液WB：使用山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（A120-101P），稀釋度參照產(chǎn)品說(shuō)明書

免疫沉淀物WB：使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體，封閉液中添加5%正常豬血清（貨號(hào)S100-020），以消除IgG重鏈（約55 kDa）的交叉干擾

預(yù)期條帶：Cul5分子量約為92 kDa（實(shí)際遷移可能因修飾略有差異）。

免疫沉淀（IP）

使用劑量：6 µg抗體/mg細(xì)胞裂解液

操作建議：

裂解液建議使用非變性裂解緩沖液（如NP-40或Triton X-100緩沖液），以維持蛋白復(fù)合物的天然狀態(tài)

抗體與裂解液共孵育2小時(shí)至過(guò)夜（4°C旋轉(zhuǎn)）

加入Protein A/G瓊脂糖珠，繼續(xù)孵育2-4小時(shí)

洗滌后，用SDS上樣緩沖液洗脫免疫復(fù)合物，進(jìn)行WB檢測(cè)

免疫組織化學(xué)（IHC）

推薦稀釋度：1:500 - 1:2000

抗原修復(fù)：對(duì)于福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片，推薦使用檸檬酸緩沖液（pH 6.0）進(jìn)行熱誘導(dǎo)抗原修復(fù)（微波或高壓鍋處理15-20分鐘）。

適用樣本：經(jīng)驗(yàn)證可檢測(cè)人及小鼠組織中的Cul5表達(dá)。

生產(chǎn)與質(zhì)控

純化工藝：使用固相載體固定的Cul5特異性N端表位（第1-50位氨基酸）進(jìn)行親和純化。該策略確?？贵w特異性識(shí)別Cul5，最大限度降低與其他Cullin家族成員的交叉反應(yīng)。

濃度測(cè)定：基于比爾定律，以1 mg/ml IgG在A280波長(zhǎng)下吸光度為1.4作為計(jì)算基準(zhǔn)。

應(yīng)用注意事項(xiàng)

1. N端表位的優(yōu)勢(shì)：本抗體靶向Cul5蛋白N端，該區(qū)域在不同Cullin家族成員中差異較大，特異性更強(qiáng)。同時(shí)，N端區(qū)域通常參與骨架裝配，但抗原親和純化保證抗體仍能識(shí)別天然構(gòu)象的Cul5。

2. 多物種反應(yīng)性：已驗(yàn)證對(duì)人和小鼠Cul5有交叉反應(yīng)。用于其他物種（如大鼠、猴）時(shí)建議先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

3. WB稀釋度范圍：1:2000-1:10,000，對(duì)于表達(dá)量較高的細(xì)胞系（如HEK293、HeLa），建議從中高稀釋度（1:5000）開始，以降低背景。若信號(hào)較弱，可適當(dāng)增加一抗?jié)舛然蜓娱L(zhǎng)曝光時(shí)間。

4. IP使用劑量：6 µg/mg裂解液是經(jīng)驗(yàn)證的起始用量。若目標(biāo)蛋白表達(dá)豐度較低，可適當(dāng)增加至10 µg/mg。建議同時(shí)設(shè)置正常兔IgG作為陰性對(duì)照，以及已知相互作用蛋白的抗體作為陽(yáng)性對(duì)照。

5. IHC抗原修復(fù)：使用FFPE切片時(shí)，務(wù)必進(jìn)行檸檬酸緩沖液（pH 6.0）熱修復(fù)。若信號(hào)強(qiáng)度不足，可嘗試EDTA緩沖液（pH 8.0-9.0），但優(yōu)先推薦檸檬酸以避免過(guò)度修復(fù)導(dǎo)致的背景升高。

6. 儲(chǔ)存與取用：2-8°C恒溫保存，避免反復(fù)開啟和溫度波動(dòng)。本品以200 µg/ml濃度提供，無(wú)需分裝，按需吸取即可。請(qǐng)勿冷凍，冷凍會(huì)導(dǎo)致抗體聚集和活性下降。

7. 疊氮鈉對(duì)HRP的影響：疊氮鈉會(huì)不可逆抑制辣根過(guò)氧化物酶活性。如使用HRP偶聯(lián)二抗及化學(xué)發(fā)光檢測(cè)，WB實(shí)驗(yàn)中可通過(guò)充分洗滌（至少3次，每次5分鐘以上）去除疊氮鈉干擾。IHC實(shí)驗(yàn)中，抗原修復(fù)步驟本身可稀釋去除疊氮鈉，但建議在抗體稀釋液中避免額外添加疊氮鈉。

相關(guān)產(chǎn)品推薦

山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（A120-101P）——用于細(xì)胞裂解液WB檢測(cè)

抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體——用于免疫沉淀物WB檢測(cè)，有效避免約55 kDa重鏈信號(hào)的干擾

正常豬血清（S100-020）——用于IP-WB封閉液添加（5%），降低非特異性背景

蛋白A/G瓊脂糖珠——用于免疫沉淀實(shí)驗(yàn)中的抗體捕獲

研究應(yīng)用場(chǎng)景

本抗體適用于以下研究方向：

E3泛素連接酶復(fù)合物組裝研究：通過(guò)免疫沉淀結(jié)合質(zhì)譜鑒定Cul5相互作用蛋白（如SOCS家族成員、Elongin B/C等）

病毒感染機(jī)制：研究HIV-1 Vif蛋白如何劫持Cul5介導(dǎo)APOBEC3G的泛素化降解

腫瘤生物學(xué)：Cul5在多種腫瘤中表達(dá)異常，參與細(xì)胞周期調(diào)控和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)

神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)：Cul5/VACM-1在加壓素信號(hào)通路中的功能研究

組織定位分析：通過(guò)IHC檢測(cè)Cul5在不同組織及病理切片中的表達(dá)分布（小鼠和人）

蛋白穩(wěn)定性調(diào)控：檢測(cè)Cul5對(duì)特定底物泛素化水平的影響