產(chǎn)品概述

本品為艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源多克隆抗體（貨號：A301-580A），特異性靶向人源CPSF160蛋白（又稱CPSF1，切割與多聚腺苷酸化特異性因子1的160 kDa亞基）。該抗體經(jīng)抗原親和純化，以完整IgG形式提供，適用于免疫組織化學(xué)（IHC）、免疫沉淀（IP）和蛋白質(zhì)印跡（WB）實驗，可識別小鼠及人類樣本中的CPSF160蛋白。

靶點(diǎn)背景：CPSF160與mRNA 3’端加工

CPSF160是切割與多聚腺苷酸化特異性因子（CPSF）復(fù)合物的核心亞基。該復(fù)合物由CPSF160、CPSF100、CPSF73和CPSF30四個蛋白組成，在哺乳動物mRNA前體的3’端加工過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。

功能機(jī)制：

CPSF160負(fù)責(zé)識別前體mRNA上的AAUAAA多聚腺苷酸化信號

與切割刺激因子（CstF）協(xié)同作用，共同識別順式作用元件

決定切割位點(diǎn)并引導(dǎo)后續(xù)的多聚腺苷酸化反應(yīng)

別名：CPSF 160 kDa subunit、CPSF160、HSU37012、P/cl.18、polyadenylation specificity factor

抗體特性規(guī)格

參數(shù) 規(guī)格

靶點(diǎn) CPSF160 (CPSF1)

宿主 兔

克隆性 多克隆

形式 完整IgG

同種型 IgG

偶聯(lián)物 非偶聯(lián)

純度 抗原親和純化

濃度 200 µg/ml

抗原物種 人

反應(yīng)性 小鼠、人

免疫原信息：

抗體識別的表位位于人CPSF160蛋白第1393位氨基酸至C末端之間。具體區(qū)域?qū)?yīng)NCBI條目NP_037423.1編號中的第1392-1442位氨基酸。

儲存與穩(wěn)定性

儲存溫度：2-8°C（請勿冷凍）

有效期：自收貨之日起1年

緩沖液：Tris緩沖鹽水，含0.1% BSA及0.09%疊氮鈉

> 注意：疊氮鈉作為防腐劑，如需進(jìn)行活細(xì)胞實驗或體內(nèi)注射，應(yīng)通過透析或超濾去除。

應(yīng)用方法與實驗條件

蛋白質(zhì)印跡（WB）

推薦稀釋度：1:2000 1:10000

通用流程要點(diǎn)：

封閉液及抗體稀釋液：5% Milk-TBST

一抗孵育：過夜

二抗選擇：

細(xì)胞裂解液WB：使用山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（A120-101P）

免疫沉淀物WB：使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體，封閉液中需添加5%正常豬血清（貨號S100-020），以降低重鏈干擾

免疫沉淀（IP）

使用劑量：6 µg抗體/mg細(xì)胞裂解液

免疫組織化學(xué)（IHC）

推薦稀釋度：1:100 1:500

抗原修復(fù)：對于福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片，推薦使用檸檬酸緩沖液（pH 6.0）進(jìn)行熱誘導(dǎo)抗原修復(fù)。

適用樣本：經(jīng)驗證可檢測人及小鼠組織中的CPSF160表達(dá)。

生產(chǎn)與質(zhì)控

純化工藝：使用固相載體固定的CPSF160特異性表位進(jìn)行親和純化，確?？贵w識別目標(biāo)區(qū)域的高特異性。

濃度測定：基于比爾定律，以1 mg/ml IgG在A280波長下吸光度為1.4作為計算基準(zhǔn)。

應(yīng)用注意事項

1. 多平臺驗證：本品經(jīng)驗證可用于IHC、IP和WB三種應(yīng)用場景，不同應(yīng)用需分別優(yōu)化條件。IHC實驗中務(wù)必進(jìn)行抗原修復(fù)。

2. WB稀釋范圍較寬（1:2000-1:10,000），建議根據(jù)目標(biāo)蛋白豐度進(jìn)行梯度預(yù)實驗。CPSF160為相對高表達(dá)的加工因子，推薦從中高稀釋度開始嘗試。

3. IP實驗中建議設(shè)置正常兔IgG作為同型對照，以排除非特異性結(jié)合背景。按6 µg/mg裂解液用量加入抗體后，可使用Protein A/G瓊脂糖珠進(jìn)行捕獲。

4. IHC使用FFPE切片時，除檸檬酸修復(fù)外，若信號較弱可嘗試EDTA修復(fù)（pH 8.0-9.0），但優(yōu)先推薦pH 6.0檸檬酸緩沖液。

5. 儲存期間避免反復(fù)溫度波動，2-8°C恒溫保存，請勿分裝后反復(fù)凍融。

6. 疊氮鈉存在條件下，如需進(jìn)行辣根過氧化物酶（HRP）檢測，疊氮鈉會抑制HRP活性，建議在二抗孵育前充分洗滌去除。

相關(guān)產(chǎn)品推薦

山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（A120-101P）——用于細(xì)胞裂解液WB檢測

抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體——用于免疫沉淀物WB檢測，有效避免重鏈干擾

正常豬血清（S100-020）——用于IP-WB封閉液添加，降低非特異性信號

研究應(yīng)用場景

本抗體適用于以下研究方向：

mRNA 3’端加工機(jī)制研究

CPSF復(fù)合物各亞基的相互作用分析

不同細(xì)胞類型或疾病狀態(tài)下CPSF160的表達(dá)水平檢測

免疫沉淀聯(lián)合質(zhì)譜鑒定CPSF復(fù)合物相互作用蛋白

組織切片中CPSF160的定位分析

本品經(jīng)驗證可同時識別人和小鼠來源的CPSF160，且兼容三種主流檢測平臺，為RNA加工領(lǐng)域的基礎(chǔ)與轉(zhuǎn)化研究提供了可靠的工具。建議使用者根據(jù)具體實驗體系對抗體稀釋度及抗原修復(fù)條件進(jìn)行個性化優(yōu)化，以獲得最佳的檢測效果。