SMC1 是 cohesin 復(fù)合物的核心組分，在染色體組織、姐妹染色單體粘連、DNA 修復(fù)和基因表達調(diào)控中發(fā)揮關(guān)鍵作用。本文基于兔抗SMC1抗體親和純化（貨號：A300-055A） 的詳細規(guī)格信息，從產(chǎn)品特性、應(yīng)用條件、實驗流程及背景知識四個維度進行系統(tǒng)性闡述，旨在為科研人員提供可直接參考的技術(shù)文檔，該產(chǎn)品由艾美捷Bethyl Laboratories推出。

一、產(chǎn)品基本規(guī)格與儲存操作

參數(shù)  | 內(nèi)容    

反應(yīng)性| 小鼠、人類

應(yīng)用  | IHC（免疫組織化學(xué)）、IP（免疫沉淀）、WB（免疫印跡）

宿主/克隆性| 兔 / 多克隆

形式  | 完整 IgG

免疫原| 位于第1183位殘基至C末端之間的區(qū)域

亞型  | IgG

標記物| 未標記

純度  | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人類

濃度| 1000 µg/ml（即 1 mg/ml）

保存條件| 2?–?8?°C

有效期| 自收貨之日起 1 年

緩沖液| Tris-檸檬酸/磷酸緩沖液，pH 7–8，含 0.09% 疊d化鈉

操作提示：  

疊d化鈉作為防腐劑，若用于活細胞實驗需通過透析或超濾去除。  

抗體濃度采用比爾定律測定（1?mg/mL IgG 在 A280 處吸光度為 1.4），用戶可根據(jù)此值自行稀釋驗證。

二、免疫原與表位定位

該抗體識別的人類 SMC1 蛋白表位位于 第 1175 位殘基與 C 末端之間（參考序列 NP_006297.2，GeneID?8243）。具體地，免疫原對應(yīng)第 1183 位至 C 末端的區(qū)域，通過親和純化方式將特異性識別該表位的抗體富集出來。這種設(shè)計確?？贵w對 SMC1 的 C 端結(jié)構(gòu)域具有高特異性，尤其適合檢測全長 SMC1 以及可能存在的 C 端截短體（需結(jié)合分子量對照驗證）。

三、推薦應(yīng)用與實驗條件

1. 免疫印跡（Western Blot, WB）

稀釋范圍：1:2?000 – 1:10?000  

封閉液與抗體稀釋液：5% 脫脂牛奶 / TBST  

一抗孵育：建議 4?°C 過夜（或室溫 2 小時，但靈敏度可能下降）  

二抗注意事項：  

檢測細胞裂解液時，推薦使用山羊抗兔 IgG（H+L）HRP 標記二抗（如 A120-101P）。  

檢測免疫沉淀產(chǎn)物時，為避免變性 IgG 重鏈（≈55?kDa）與目標蛋白（SMC1 約 150?kDa）信號干擾，必須使用兔 IgG 輕鏈特異性 HRP 二抗。同時建議在封閉液中加入 5% 正常豬血清（Cat.?No.?S100-020）以降低非特異性背景。

建議陽性對照：HeLa、HEK293 或小鼠胚胎成纖維細胞全裂解液。SMC1 在多種人及小鼠細胞系中普遍表達。

2. 免疫沉淀（Immunoprecipitation, IP）

使用量：6?μg 抗體 / mg 總蛋白裂解液  

步驟簡要：  

1） 制備裂解液（推薦使用非變性裂解緩沖液，如 50?mM Tris pH?7.4, 150?mM NaCl, 1% NP-40, 0.5% 脫氧膽酸鈉，添加蛋白酶抑制劑）。  

2）每 mg 總蛋白加入 6?μg 抗體，4?°C 旋轉(zhuǎn)孵育 2 小時或過夜。  

3）加入 Protein?A/G 磁珠（或瓊脂糖珠），繼續(xù)孵育 1-2 小時。  

4）洗滌 3-5 次后，用 SDS 上樣緩沖液洗脫，進行 WB 檢測。

3. 免疫組織化學(xué)（Immunohistochemistry, IHC）

稀釋范圍：1:2?000 – 1:10?000  

抗原修復(fù)：推薦使用 檸檬酸鈉緩沖液（pH?6.0） 進行熱修復(fù)（如微波或高壓鍋煮沸 10-15 分鐘）。  

適用樣本：福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）的人或小鼠組織切片。  

檢測系統(tǒng)：建議采用生物素-鏈霉親和素-HRP 或聚合物法，DAB 顯色。陰性對照可用兔 IgG 同型對照或僅使用二抗。

經(jīng)驗提示：多克隆抗體在 IHC 中可能出現(xiàn)核漿背景，建議滴定從 1:5000 開始，并用正常血清封閉至少 30 分鐘。

四、SMC1 功能背景與抗體應(yīng)用意義

1. 分子生物學(xué)功能

SMC 家族蛋白（結(jié)構(gòu)維持染色體蛋白）參與形成 cohesin 和 condensin 復(fù)合物。其中 cohesin 核心復(fù)合物由 SMC1 和 SMC3 異源二聚體構(gòu)成，通過形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)將姐妹染色單體從 DNA 復(fù)制期至有絲分裂中期“擁抱"在一起。這一過程對于：

姐妹染色單體分離：有絲分裂后期，separase 切割 cohesin 亞基 RAD21 釋放染色單體。  

DNA 雙鏈斷裂修復(fù)：同源重組修復(fù)依賴 cohesin 將斷裂點與同源序列拉近。  

基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控：cohesin 通過介導(dǎo)染色質(zhì)環(huán)構(gòu)建，影響增強子-啟動子通訊。

2. 疾病相關(guān)性

人類 _SMC1A_ 基因突變可導(dǎo)致 Cornelia de Lange 綜合征（CdLS2 型），表現(xiàn)為顱面畸形、生長遲緩和智力障礙。此外，SMC1 在多種癌細胞中異常表達，影響基因組穩(wěn)定性。因此，特異性的 SMC1 抗體不僅用于基礎(chǔ)研究，也適用于疾病機制探索。

3. 該抗體的優(yōu)勢

C 末端表位：避免與 N 端截短蛋白發(fā)生交叉反應(yīng)，在檢測全長 SMC1 時信號更可靠。  

寬稀釋范圍：從 1:2000 至 1:10000 均可獲得清晰條帶，允許用戶根據(jù)樣本豐度靈活優(yōu)化。  

多應(yīng)用驗證：同時適用于 WB、IP、IHC，減少不同實驗間抗體批次的差異。  

穩(wěn)定性：在 2–8?°C 可保存一年，便于日常取用，不需要分裝凍存（但需避免反復(fù)升溫至室溫過久）。

總結(jié)

A300-055A 是一款經(jīng)親和純化的兔抗 SMC1 多克隆抗體，識別人類及小鼠 SMC1 蛋白 C 端區(qū)域（1183–末端），適用于 WB、IP 和 IHC。其優(yōu)化的緩沖體系、明確的稀釋范圍以及針對性配套二抗方案，能夠幫助研究者穩(wěn)定檢測 cohesin 復(fù)合物行為。實驗人員應(yīng)嚴格遵守儲存條件、根據(jù)應(yīng)用選擇適當?shù)亩购头忾]策略，并利用陽性對照進行批次間驗證。對于涉及染色體結(jié)構(gòu)、DNA 修復(fù)及發(fā)育相關(guān)基因調(diào)控的研究，該抗體是一個功能可靠的工具。