產(chǎn)品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的Rad18抗體（貨號A301-340A）是一種兔源多克隆抗體，特異性靶向人源E3泛素蛋白連接酶Rad18。該抗體以全I(xiàn)gG形式提供，濃度為200 µg/ml，經(jīng)抗原親和純化，未偶聯(lián)標(biāo)記物，適用于免疫沉淀（IP）和Western Blot（WB）檢測。

免疫原與特異性

本抗體的免疫原對應(yīng)人源Rad18蛋白第445至495位氨基酸殘基之間的區(qū)域，參考序列號為NP_064550.2（GeneID 56852）。通過表位特異性親和純化工藝，將針對Rad18固定化表位的抗體從抗血清中分離純化，確保高特異性識別目標(biāo)抗原。

技術(shù)參數(shù)

參數(shù) | 詳細(xì)信息

靶標(biāo) | Rad18 (RAD18, E3 ubiquitin protein ligase)

反應(yīng)性 | 人

應(yīng)用 | 免疫沉淀（IP）、Western Blot（WB）

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全I(xiàn)gG

免疫原 | 第445位–C末端之間（具體為445-495位）

同型 | IgG

偶聯(lián)物 | 未偶聯(lián)

純度 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人

濃度 | 200 µg/ml

儲存條件 | 2–8 °C

保質(zhì)期 | 收貨后1年

緩沖液 | Tris緩沖鹽水，含0.1% BSA及0.09%疊d化鈉

濃度測定方法

免疫球蛋白濃度采用比爾定律測定，其中1 mg/ml IgG在280 nm波長下的吸光度（A280）為1.4。

Western Blot實驗方案

推薦稀釋度

1:2,000 – 1:10,000

實驗條件

封閉及稀釋液：5%脫脂牛奶-TBST

一抗孵育：過夜孵育

二抗（細(xì)胞裂解液WB）：山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（貨號A120-101P）

二抗（免疫沉淀物WB）：使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體，并在封閉緩沖液中加入5%正常豬血清（貨號S100-020），以避免重鏈交叉干擾。

免疫沉淀實驗方案

推薦用量：6 µg抗體/mg細(xì)胞裂解物

靶點背景信息

蛋白功能

Rad18是一種E3泛素蛋白連接酶，其關(guān)鍵功能是與E2泛素結(jié)合酶UBE2B（也稱為Rad6b）結(jié)合。在DNA復(fù)制叉停滯時，Rad18介導(dǎo)PCNA的單泛素化修飾。這一修飾事件能夠招募DNA修復(fù)聚合酶（例如DNA聚合酶η，Polη），啟動跨損傷合成（translesion synthesis, TLS），從而使細(xì)胞能夠繞過DNA損傷位點繼續(xù)進(jìn)行復(fù)制，防止復(fù)制叉崩潰和基因組不穩(wěn)定。

別稱

E3 ubiquitin-protein ligase RAD18、hHR18、hRAD18、postreplication repair protein hRAD18p、postreplication repair protein RAD18、RAD18 homolog、RAD18, S. cerevisiae, homolog、RING finger protein 73 (RNF73)、RING-type E3 ubiquitin transferase RAD18

產(chǎn)品優(yōu)勢與功能特點

1. 雙重應(yīng)用驗證：同時適用于免疫沉淀和Western Blot，且WB稀釋范圍寬廣（1:2,000–1:10,000），IP推薦用量明確（6 µg/mg裂解物），便于實驗設(shè)計與優(yōu)化。

2. 高特異性親和純化：采用針對Rad18第445-495位表位的固相親和純化，去除非特異性血清成分，顯著降低背景信號，提高檢測信噪比。

3. 穩(wěn)定儲存配方：緩沖液含0.1% BSA作為穩(wěn)定蛋白，0.09%疊d化鈉作為防腐劑，Tris緩沖鹽水維持離子環(huán)境，2–8°C下可穩(wěn)定保存1年，避免反復(fù)凍融導(dǎo)致的活性下降。

4. 精準(zhǔn)定量：基于比爾定律（A280=1.4對應(yīng)1 mg/ml IgG）進(jìn)行濃度檢測，確保批次間一致性和實驗可重復(fù)性。

5. 適配IP-WB聯(lián)用：提供針對免疫沉淀后Western Blot的二抗選擇建議（抗兔IgG輕鏈HRP抗體+正常豬血清），有效避免膜上重鏈的干擾信號。

使用注意事項

本產(chǎn)品僅限研究用途，不可用于臨床診斷。

緩沖液中含有疊d化鈉，操作時請佩戴適當(dāng)防護(hù)裝備。

IP實驗中，6 µg/mg裂解物為起始推薦量，可根據(jù)目標(biāo)蛋白豐度和抗體批次進(jìn)行微調(diào)。

WB實驗中，建議從1:5,000稀釋度開始優(yōu)化，根據(jù)信號強(qiáng)度和背景調(diào)整稀釋倍數(shù)。

收貨后請立即儲存于2–8°C，切勿冷凍。分裝可減少污染風(fēng)險，但需注意分裝后仍應(yīng)保持2–8°C（不可冷凍）。

過期產(chǎn)品不建議使用，請按照機(jī)構(gòu)規(guī)定處理含疊d化鈉的廢棄物。