在細(xì)胞應(yīng)激響應(yīng)與DNA損傷修復(fù)研究中，PARylation（多聚ADP-核糖化）作為一種關(guān)鍵的可逆翻譯后修飾，正日益受到廣泛關(guān)注。由PARP家族（PAR聚合酶）和PARG（PAR糖水解酶）共同調(diào)控的PAR穩(wěn)態(tài)，在炎癥、缺血、卒中及癌癥等多種疾病進(jìn)程中發(fā)揮著重要作用。針對PARP的抑制劑已在腫瘤治療中獲得成功，而PARG的過度表達(dá)與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。因此，準(zhǔn)確、便捷地檢測細(xì)胞內(nèi)的總PARylation水平，對于基礎(chǔ)研究及藥物開發(fā)具有重要意義。由艾美捷代理BPS Bioscience研發(fā)的LysA Universal PARylation檢測試劑盒（貨號：82123）正是為此設(shè)計(jì)的一套完整的酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）解決方案。

圖1：LysA通用PAR化檢測工作流程圖。

使用抗標(biāo)準(zhǔn)桿數(shù)（PAR）抗體包被96孔板。將細(xì)胞裂解液加入包被的孔中，使細(xì)胞裂解液中的標(biāo)準(zhǔn)桿數(shù)（PAR化蛋白）被抗體捕獲。隨后與抗標(biāo)準(zhǔn)桿數(shù)一抗和HRP標(biāo)記的二抗孵育。加入化學(xué)發(fā)光HRP底物后產(chǎn)生發(fā)光信號，該信號與細(xì)胞提取物中標(biāo)準(zhǔn)桿數(shù)的含量直接相關(guān)。

一、核心原理與檢測性能

該試劑盒采用夾心ELISA原理，專用于定量檢測細(xì)胞提取物中的總多聚ADP-核糖化水平。其獨(dú)特之處在于提供了PAR標(biāo)準(zhǔn)品，用戶可據(jù)此建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，實(shí)現(xiàn)絕對定量。檢測范圍經(jīng)驗(yàn)證在100 pM至20 nM PARylation區(qū)間內(nèi)呈良好線性關(guān)系，確保了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精確性與可重復(fù)性。

試劑盒采用96孔板形式，包含實(shí)驗(yàn)所需的全部核心組分：特異性抗體、封閉緩沖液、檢測試劑以及作為質(zhì)控的細(xì)胞裂解物。這種“開箱即用"的設(shè)計(jì)極大簡化了實(shí)驗(yàn)流程，減少了因自行配制試劑引入的批次間差異。

二、適用場景與主要應(yīng)用

該試劑盒主要面向以下三類核心應(yīng)用場景：

1. 培養(yǎng)細(xì)胞中總PAR水平的定量分析：研究人員可直接處理貼壁或懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，裂解后利用試劑盒測定不同處理?xiàng)l件下細(xì)胞內(nèi)PARylation的總體變化。

2. PARP或PARG抑制劑在細(xì)胞中的IC50測定：在藥物篩選過程中，通過梯度處理候選化合物，可便捷計(jì)算出抑制劑的半數(shù)抑制濃度，為構(gòu)效關(guān)系研究提供關(guān)鍵數(shù)據(jù)。

3. 細(xì)胞模型中PARP或PARG抑制劑的藥效驗(yàn)證：除單純的活性測定外，該試劑盒還可用于評估抑制劑在真實(shí)細(xì)胞環(huán)境中的作用效果，驗(yàn)證其是否如預(yù)期般降低PARylation水平，從而關(guān)聯(lián)到細(xì)胞表型變化。

三、操作流程與所需配套材料

盡管試劑盒提供了核心檢測試劑，用戶仍需自行準(zhǔn)備以下關(guān)鍵輔助材料以獲得最佳結(jié)果：

改良RIPA裂解液（中強(qiáng)度）（BPS Bioscience 82126）：用于充分提取細(xì)胞蛋白，同時(shí)維持PAR修飾的穩(wěn)定性。

LysA蛋白酶抑制劑混合物試劑盒（BPS Bioscience 82199）：防止蛋白降解，保證檢測準(zhǔn)確性。

ADP-核糖化循環(huán)抑制劑混合物（82130）或w全ADP-核糖化循環(huán)抑制劑混合物（82539）：這兩項(xiàng)尤其重要——由于細(xì)胞內(nèi)存在動態(tài)的PAR合成與降解循環(huán)，加入抑制劑可“凍結(jié)"取樣瞬間的PARylation真實(shí)水平，避免在樣品處理過程中因內(nèi)源性PARG或ARH3活性導(dǎo)致信號衰減。

基本操作流程包括：細(xì)胞接種與藥物處理 → 裂解液（含抑制劑）裂解 → 蛋白定量 → 加入預(yù)包被板孵育 → 檢測抗體結(jié)合 → 化學(xué)發(fā)光底物顯色 → 酶標(biāo)儀讀數(shù) → 依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算PAR濃度。

四、存儲穩(wěn)定性與運(yùn)輸條件

試劑盒采用-80°C超低溫運(yùn)輸，所有組分在收貨后按指示存儲條件下，自收貨之日起6個(gè)月內(nèi)保持最佳性能。用戶需特別注意：反復(fù)凍融可能降低試劑活性，建議s次解凍后分裝保存。

五、注意事項(xiàng)與局限性

特異性：該試劑盒僅檢測多聚ADP-核糖化（PARylation），無法識別單ADP-核糖化（MARylation）。若研究重點(diǎn)為單修飾，需選擇其他專用工具。

線性范圍：嚴(yán)格控制在100 pM–20 nM范圍內(nèi)定量。超出該范圍的高濃度樣本需進(jìn)行適當(dāng)稀釋后重新測定。

物種兼容性：試劑盒設(shè)計(jì)基于人源細(xì)胞體系，但在模式生物（如小鼠、大鼠）細(xì)胞中的交叉反應(yīng)性需用戶自行驗(yàn)證。

六、文獻(xiàn)參考

Marques M., et al., 2019 Oncogene 38 (12): 2177-2191.

James D. I., et al., 2016 ACS Chem Biol 11 (11): 3179-3190.

Drown B. S., et al., 2018 Cell Chem Bio 25 (12): 1562-1570.