
做 Western Blot 蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn),一抗孵育溫度直接決定條帶清晰度、特異性與實(shí)驗(yàn)效率,多數(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果不佳,都是溫度選擇不當(dāng)導(dǎo)致。目前實(shí)驗(yàn)室主流使用三種孵育溫度:4℃低溫孵育、常溫室溫孵育、37℃恒溫孵育,三種模式適配不同實(shí)驗(yàn)樣本與實(shí)驗(yàn)需求,不可通用套用。
4℃過夜孵育是科研高精度實(shí)驗(yàn)首-選,抗原與一抗結(jié)合更加溫和穩(wěn)定,大程度減少非特異性結(jié)合,有效降低膜片雜帶與高背景問題,非常適合磷酸化蛋白、低豐度表達(dá)蛋白、微量蛋白樣本檢測。
室溫孵育兼顧實(shí)驗(yàn)效率與實(shí)驗(yàn)效果,無需低溫設(shè)備,操作簡單便捷,適配絕大多數(shù)常規(guī)蛋白表達(dá)檢測,也是實(shí)驗(yàn)室日常批量 WB 實(shí)驗(yàn)常用的孵育方式。
37℃恒溫孵育反應(yīng)速度最快,能夠大幅縮短整體實(shí)驗(yàn)時(shí)長,適合實(shí)驗(yàn)結(jié)果快速驗(yàn)證、初篩樣本檢測以及二抗快速孵育使用,不建議高嚴(yán)謹(jǐn)性定量實(shí)驗(yàn)長期使用。
科研人員可根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、蛋白表達(dá)豐度、實(shí)驗(yàn)周期靈活搭配孵育溫度與孵育時(shí)長,從源頭規(guī)避 WB 實(shí)驗(yàn)常見失誤,穩(wěn)定輸出優(yōu)質(zhì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
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