一、用途:
用于副溶血性弧菌生化鑒定。
二、實(shí)驗(yàn)原理:
某些細(xì)菌可產(chǎn)生精氨酸脫羧酶,使精氨酸脫去羧基,生成精胺,從而使培養(yǎng)基變堿性并通過指示劑變色來觀察。脫羧酶是適應(yīng)酶或稱誘導(dǎo)酶,對(duì)底物有特異性,在無相對(duì)氨基酸的培養(yǎng)基中不產(chǎn)生此酶,并且需要酸性環(huán)境和適宜溫度。故在培養(yǎng)基中加入葡萄糖,使細(xì)菌發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸,以利于脫羧酶的產(chǎn)生。氨基酸的分解是在厭氧條件下進(jìn)行,故在培養(yǎng)基表面加液體石蠟。由于細(xì)菌發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸,在培養(yǎng)初期培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基呈黃色,繼續(xù)培養(yǎng)時(shí),若氨基酸經(jīng)脫羧或水解產(chǎn)生胺類則培養(yǎng)基變堿,呈紫色或紫紅色,即為陽性反應(yīng);如至培養(yǎng)末期培養(yǎng)基如同對(duì)照管一樣均呈黃色,則判為陰性反應(yīng)。
二、培養(yǎng)基成分(g/L):
酵母浸粉 | 3.0 |
L-精氨酸 | 5.0 |
葡萄糖 | 1.0 |
溴甲酚紫 | 0.016 |
氯化鈉 | 30.0 |
pH 6.7±0.1 25℃ |
四、試驗(yàn)方法:
1. 將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株接種到非選擇性肉湯中或采用其他制備方法,制備成5 McFarland濁度(約109CFU/ml)的菌懸液。
2. 吸取0.05ml-0.08ml(約1-2滴)菌懸液至生化管中,并覆蓋一層無菌液體石蠟,并同時(shí)做無氨基酸對(duì)照生化管,36±1℃培養(yǎng)24±2h后,觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
五、微生物試驗(yàn):
接種以下質(zhì)控菌株,36±1℃培養(yǎng)24±2h:
質(zhì)控菌株 | 菌株編號(hào) | 生長(zhǎng)情況 | 其他特征 |
副溶血性弧菌 | ATCC17802 | +++ | 陰性,黃色 |
普通變形桿菌 | ATCC13315 | +++ | 陰性,黃色 |
溶藻弧菌 | ATCC17749 | +++ | 陰性,黃色 |
阪崎腸桿菌 | ATCC29004 | +++ | 陽性,紫色 |
創(chuàng)傷弧菌 | ATCC27562 | +++ | 陰性,黃色 |
六、方法的局限性
本培養(yǎng)基僅為細(xì)菌鑒定的一部分,需做其他補(bǔ)充試驗(yàn)。