細胞轉染—PEI 配置方法及轉染流程

一、Polysciences產(chǎn)品介紹

Polysciences公司提供一系列PEI產(chǎn)品：研究級產(chǎn)品PEI MAX和Transporter 5，以及cGMP級MAXgene GMP，提供適合于任何規(guī)模AAV、LV病毒載體和重組蛋白制造的成本效益更高、供應可靠且更高質量的轉染試劑。

PEI MAX 是一款高濃縮的粉劑，多數(shù)科學家選擇PEI MAX ，在內部自行制備更低成本、效益更高的轉染試劑。多年以來，經(jīng)過眾多業(yè)內人士評審的公開研究和出版文獻表明，在HEK293、CHO 和 Sf9系統(tǒng)中可獲得更高的轉染效率，在重組抗體和病毒載體生產(chǎn)中穩(wěn)定性更高，可靠性更強。PEI MAX是一種非GMP等級轉染試劑，適用于基礎科學研究及藥物研發(fā)早期階段。

PEI MAX 40K 是線性Polyethylenimine，PEI鹽酸鹽形式，是線性Polyethylenimine PEI 25K的升級產(chǎn)品。相比于PEI25K，PEI MAX 40K ：

· 水解形式（去乙?；?；

· 鹽酸鹽形式，具更高的水溶特性；

· 含更長連續(xù)性片段，其質子化氮水平比PEI 25K提高11%以上。

Transporter 5轉染試劑是一種即用型線性PEI衍生物。由PEI MAX配置而成的即用型無菌試劑，采用0.1μm PES無菌過濾器，可消除支原體污染風險。適用于工藝開發(fā)、臨床前和早期臨床研究，助力過渡到MAXgene用于cGMP生產(chǎn)。

MAXgene GMP (cat# 26406/26435) 是一種cGMP轉染試劑，在Polysciences研究等級轉染試劑（PEI MAX 或 Transporter 5)的效率和可擴展性基礎上增加了驗證工藝和監(jiān)管流流程，適用于細胞和基因治療病毒載體的研發(fā)和生產(chǎn)。

二、產(chǎn)品特點-Polysciences PEI轉染試劑

Polysciences PEI轉染試劑優(yōu)勢：

· 更高質量的R&D和cGMP等級產(chǎn)品；

· 更高轉染效率，更低細胞毒性；

· MAXgene符合cGMP標準和ISO13485質量管理體系；

· 經(jīng)過驗證的生產(chǎn)工藝；

· 以“全合成"形式，無動物源成分；

· 更高性價比，適用于從早期研發(fā)到臨床及商業(yè)化生產(chǎn)的各個階段；

· 嚴格控制批間穩(wěn)定性；

· 國內外已有多個項目進入臨床階段；

· 具備殘留檢測方法。

三、使用方法

PEI MAX粉末配置方法：

1) 將1g PEI MAX 40K放入盛有900 mL水的玻璃燒杯中

2) 放入攪拌轉子，放置于磁力攪拌器上，設置攪拌程序以形成一個較小的漩渦

3) 等待PEI MAX 40K溶解，通常需要5分鐘左右

4) 用25 mL塑料移液管加入1 N NaOH溶液滴定至pH 6.9~7.1

5) 如果不小心超過7.1，則使用1N的鹽酸和新的塑料移液管將pH重新滴定至6.9~7.1

6) 將溶液轉移到1L玻璃量筒中，加入水定容至1L

7) 用無菌真空過濾膜過濾配制的轉染試劑溶液

8) 按需分裝，4°C儲存

注：未經(jīng)配制的粉末有效期為2年。

配置成液體后分裝在合適的瓶子中，并且保存在4℃的轉染試劑將可在6個月之內保持性能，如僅用于蛋白定性研究，分裝的轉染試劑可延長有效使用期至1年。

四、經(jīng)過馴化的無血清培養(yǎng)懸浮細胞轉染流程

1. 準備工作

轉染前2~3小時，種植細胞密度為 1X106/mL 于培養(yǎng)容器中。 

2. 轉染步驟

（以250 mL搖瓶為例，轉染前種植細胞總體積為25mL，最終總培養(yǎng)體積為50mL） ，準備PEI-DNA 轉染混合物（按照以下操作順序）：

1) 在含有2.5mL（25mL 的 10%）稀釋液的 EP 管中加入50ug質粒DNA（質粒用量建議在 1~2ug/106細胞之間優(yōu)化，此處使用1ug/106細胞）

2) 輕輕地混勻/振蕩溶液 

3) 在DNA溶液中加入50~200uL PEI轉染試劑（PEI/DNA 的比例建議在1~4：1之間優(yōu)化，初次推薦使用2：1或3：1） 

4) 渦旋振蕩5秒鐘 

5) 將管子靜置于超凈工作臺10~15分鐘，使 PEI-DNA 復合物形成（建議共孵育時間不超過20分鐘） 

6) 用移液器輕輕上下吹打混合液3次 

注：邊晃動搖瓶，邊將PEI-DNA 混合液加入更換了培養(yǎng)基的轉染孔中，確保 PEI-DNA 復合物均勻分布，防止局部濃度過高。

3. 孵育培養(yǎng)

將細胞培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱，搖瓶培養(yǎng)2~3小時后，加入25 mL新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。 

通常，在轉染后36-48小時可檢測到重組蛋白表達或包裝的病毒顆粒。轉染后72-96小時可觀察到更大產(chǎn)量。

五、客戶體驗

注：上海曼博生物是Polysciences授權中國直售提供商（申明日期：2024年1月1日）