PEI轉(zhuǎn)染試劑怎么用才對？這10處細節(jié)提升轉(zhuǎn)染效率｜轉(zhuǎn)染優(yōu)化指南（下）

摘要：本文繼續(xù)深挖PEI細胞轉(zhuǎn)染的進階實操！黃金質(zhì)粒比例（2:1.5:1）、PEI與DNA的最佳配比，AB液混合法及孵育體積控制，曼博生物幫您厘清提升轉(zhuǎn)染效率的核心參數(shù)，明確慢病毒/AAV的最佳收獲時間點。

關鍵詞：細胞轉(zhuǎn)染,PEI轉(zhuǎn)染試劑,質(zhì)粒轉(zhuǎn)染,DNA轉(zhuǎn)染, AAV病毒,蛋白生產(chǎn)工藝,干細胞治療,細胞培養(yǎng),細胞與基因治療

細胞轉(zhuǎn)染技術在CGT開發(fā)中扮演著重要角色。為提高轉(zhuǎn)染效率和病毒包裝產(chǎn)量，研究者們需要對轉(zhuǎn)染工藝中的多個參數(shù)進行優(yōu)化。上期文章曼博生物已從細胞轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基選擇、培養(yǎng)空間與體積、細胞質(zhì)量與狀態(tài)、細胞密度，以及質(zhì)粒DNA的質(zhì)量與用量角度提出了5個優(yōu)化關鍵點，本期將繼續(xù)為大家?guī)砥渌麅?yōu)化轉(zhuǎn)染的實踐指南。

首先，是質(zhì)粒比例。對于AAV包裝，載體質(zhì)粒：復制&包裝質(zhì)粒：轉(zhuǎn)移目標基因的初始建議質(zhì)粒比例為2:1.5:1。

其次，PEI與質(zhì)粒DNA的比例直接影響復合體的穩(wěn)定性，建議從2:1開始優(yōu)化。

同時，孵育體積影響質(zhì)粒DNA與PEI復合體的形成和與細胞的有效接觸。建議孵育體積維持在總培養(yǎng)體積的5%-10%。

對于孵育方式與時間，推薦采用AB液的形式，即分別配置質(zhì)粒DNA溶液和PEI溶液，然后將PEI溶液加入質(zhì)粒DNA溶液中。孵育時間建議控制在10-20分鐘。

最后，由于病毒顆粒的收獲時間影響病毒滴度，因此建議慢病毒在轉(zhuǎn)染后48小時收獲，AAV病毒在轉(zhuǎn)染后72小時收獲。

細胞轉(zhuǎn)染的成功依賴于對多個參數(shù)的嚴格優(yōu)化，希望這兩期PEI轉(zhuǎn)染試劑關鍵參數(shù)的分享能為科研伙伴提供實用的參考。

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