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在生命科學研究和藥物開發(fā)中，細胞因子參與了許多病理過程，是免疫學、炎癥研究、腫瘤微環(huán)境分析等領域的重要檢測指標。然而，傳統(tǒng)的免疫測定方法雖然經典，但往往面臨耗時、樣本需求量大、檢測范圍窄、單因子檢測等挑戰(zhàn)。瑞孚迪（Revvity）推出的AlphaPlex技術能夠在同一樣本中對兩種不同的細胞因子進行分析，是一種高效、靈敏、均相的免疫檢測平臺。
檢測原理
以IL-6和IL-8的檢測為例 (圖1)：生物素化的抗分析物抗體與涂有鏈霉親和素的Alpha供體磁珠 (Donor beads) 結合；而其他抗分析物抗體則分別與AlphaLISA（IL-8）或AlphaPlex 545 (IL-6) 受體磁珠 (Acceptor beads) 結合。在分析物存在的情況下，這些磁珠會相互靠近。這種接近會引發(fā)一系列反應：供體磁珠在680 nm激光激發(fā)下，將周圍的氧氣轉化為單線態(tài)氧分子；隨后，單線態(tài)氧分子觸發(fā)受體磁珠中的能量傳遞級聯反應，在AlphaLISA磁珠上產生615 nm的發(fā)射光，在AlphaPlex 545磁珠上產生545 nm的發(fā)射光，信號與待檢物成正比。
圖1 AlphaPlex IL-6/IL-8檢測原理
數據展示
圖2 HT-29(左)和 HELA(右)細胞培養(yǎng)條件中IL-6 和 IL-8 的標準曲線
我們研究了HT-29和HeLa細胞中IL-6和IL-8的差異調節(jié)作用。針對HT-29（圖2左）和HeLa（圖2右）細胞系，分別繪制了兩種細胞因子的獨立標準曲線，以確?；|的均勻性。對這兩種細胞系進行饑餓處理后，用5 ng/mL的IL-1β刺激24小時。
數據表明，HT-29細胞即使數量很少也能產生大量的IL-8，但未檢測到IL-6的含量 (表1)。HeLa細胞能夠高水平產生這兩種細胞因子，即使在每孔625個細胞的情況下，也能檢測到其含量 (表2)。IL-6/IL-8雙因子檢測法識別了兩種不同細胞系產生的特定細胞因子，顯示出IL-6在HT-29 (無法測出) 和HeLa (納摩爾級) 之間分泌模式的顯著差異。
總結
本文展示了利用AlphaLISA和AlphaPlex 545磁珠構建的雙因子免疫檢測方法在不同細胞系中的驗證數據。該方法使實驗更具效率：每孔可同時檢測兩組分析物，在實現定量分析的同時顯著節(jié)省時間和成本。通過這一檢測方法，我們能夠在單個孔中為兩種目標細胞因子建立高靈敏度、寬動態(tài)范圍和高特異性的標準曲線，同時保留了Alpha技術在復雜基質中的抗干擾能力，使其可應用于細胞上清、血清血漿等動物樣本 (參考推文)。 這些特性使AlphaPlex技術成為一種適用于測量復雜生物體系中雙因子的有效檢測手段。
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