產(chǎn)品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的eIF3B/EIF3S9抗體（貨號A301-761A）是一種兔源多克隆抗體，特異性靶向人源真核翻譯起始因子3亞基B（eukaryotic translation initiation factor 3 subunit B，亦稱eIF3S9或eIF3 p110）。該抗體以全IgG形式提供，濃度為200 µg/ml，經(jīng)抗原親和純化，未偶聯(lián)標記物，適用于免疫組化（IHC）、免疫沉淀（IP）和Western Blot（WB）檢測。

免疫原與特異性

本抗體的免疫原對應人源eIF3B蛋白第100至150位氨基酸殘基之間的區(qū)域，參考序列號為NP_003742.2（GeneID 8662）。通過表位特異性親和純化工藝，將針對eIF3B固定化表位的抗體從抗血清中分離純化，確保高特異性識別目標抗原。該表位位于eIF3B蛋白的N端附近，該區(qū)域包含一個非經(jīng)典的RNA識別基序（RRM），與eIF3復合物的組裝和RNA結(jié)合功能密切相關(guān)。

技術(shù)參數(shù)

參數(shù) | 詳細信息

靶標 | eIF3B / EIF3S9 (Eukaryotic translation initiation factor 3 subunit B)

反應性 | 人

應用 | 免疫組化（IHC）、免疫沉淀（IP）、Western Blot（WB）

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

免疫原 | 第100–150位氨基酸區(qū)間

同型 | IgG

偶聯(lián)物 | 未偶聯(lián)

純度 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人

濃度 | 200 µg/ml

儲存條件 | 2–8 °C

保質(zhì)期 | 收貨后1年

緩沖液 | Tris緩沖鹽水，含0.1% BSA及0.09%疊d化鈉

濃度測定方法

免疫球蛋白濃度采用比爾定律測定，其中1 mg/ml IgG在280 nm波長下的吸光度（A280）為1.4。

Western Blot實驗方案

推薦稀釋度

1:2,000 – 1:10,000

實驗條件

封閉及稀釋液：5%脫脂牛奶-TBST

一抗孵育：過夜孵育（4°C）

二抗（細胞裂解液WB）：山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（貨號A120-101P）

二抗（免疫沉淀物WB）：使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體，并在封閉緩沖液中加入5%正常豬血清（貨號S100-020），以避免免疫沉淀洗脫物中IgG重鏈（約55 kDa）對目標信號產(chǎn)生干擾。

樣品制備與凝膠選擇

eIF3B分子量約為110–116 kDa。推薦使用8-10% SDS-PAGE凝膠進行分離。轉(zhuǎn)印可采用濕轉(zhuǎn)（100V，1.5小時）或半干轉(zhuǎn)。使用PVDF或硝酸纖維素膜均可。

免疫沉淀實驗方案

推薦用量：6 µg抗體/mg細胞裂解物

裂解液建議：推薦使用含蛋白酶抑制劑的溫和裂解緩沖液（如50 mM Tris-HCl pH 7.5，150 mM NaCl，1% NP-40，0.5%脫氧膽酸鈉），以維持eIF3全復合物的完整性。

捕獲基質(zhì)：Protein A瓊脂糖或磁珠。

免疫組化實驗方案

推薦稀釋度：1:100 – 1:500

抗原修復：對于福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片，推薦使用檸檬酸緩沖液（pH 6.0）進行熱誘導抗原修復（微波或高壓修復）。

封閉與檢測：建議使用5%正常血清（與二抗同源）封閉非特異性結(jié)合位點?？刹捎蒙锼鼗古浜螪AB顯色，或熒光標記二抗進行免疫熒光檢測。

靶點背景信息

蛋白功能

真核起始因子3亞基B（eIF3B）是真核起始因子3（eIF3）至少13個非相同蛋白亞基之一。eIF3是最大的真核起始因子（約650 kDa），其核心功能是促進40S核糖體亞基結(jié)合至細胞mRNA 5’端帽子結(jié)構(gòu)（m7GpppN）附近，從而啟動翻譯。

eIF3B是一個保守的亞基，屬于eIF3的功能核心組分。它具有一個非經(jīng)典的RNA識別基序（RRM），并能直接與eIF3S1亞基相互作用。eIF3B在eIF3復合物組裝、mRNA識別以及43S前起始復合物形成中發(fā)揮關(guān)鍵作用。

結(jié)構(gòu)與相互作用

分子量：約110–116 kDa（氨基酸序列計算值約105 kDa，SDS-PAGE表觀分子量約110–116 kDa）。

亞基定位：eIF3B位于eIF3復合物的核心區(qū)域，與eIF3A、eIF3C、eIF3G等亞基共同構(gòu)成復合物骨架。

相互作用伙伴：除eIF3S1外，eIF3B還與其他eIF3亞基、40S核糖體蛋白及mRNA結(jié)合蛋白相互作用。

產(chǎn)品優(yōu)勢與功能特點

1. 三平臺通用驗證（IHC/IP/WB）：本抗體在免疫組化、免疫沉淀和Western Blot中均提供推薦工作條件，覆蓋了組織定位、蛋白復合物捕獲和表達定量的一體化研究需求。IHC起始稀釋度1:100–1:500，并明確提供檸檬酸緩沖液pH 6.0修復方案；WB稀釋范圍1:2,000–1:10,000，靈敏度高，適合內(nèi)源性eIF3B檢測。

2. 抗原親和純化：采用針對eIF3B第100–150位表位的固相親和純化，有效去除與其它eIF3亞基或非特異性蛋白交叉反應的抗體，顯著降低IHC和WB中的背景信號，提高IP產(chǎn)物的純度。

3. BSA穩(wěn)定化TBS配方：緩沖液含0.1% BSA作為載體蛋白，防止抗體在低濃度下吸附損失；0.09%疊d化鈉作為防腐劑。2–8°C下可穩(wěn)定保存1年，無需冷凍，避免反復凍融導致的活性下降。

4. IP-WB聯(lián)用優(yōu)化設計：配套提供抗兔IgG輕鏈HRP二抗及5%正常豬血清封閉方案，有效消除免疫沉淀洗脫物中55 kDa重鏈的干擾信號，確保在eIF3B分子量（110 kDa）附近獲得清晰的目標條帶。

5. 精準定量：基于比爾定律（A280=1.4對應1 mg/ml IgG）進行濃度測定，確保批次間一致性，提升實驗可重復性。

6. 明確的表位區(qū)域：免疫原映射至100-150位氨基酸，該區(qū)域包含eIF3B的非經(jīng)典RRM基序。使用本抗體進行IP或WB時，可檢測全長蛋白，且識別位點不依賴于磷酸化或翻譯后修飾狀態(tài)。

使用注意事項

本產(chǎn)品僅限研究用途，不可用于臨床診斷。

緩沖液中含有疊d化鈉，操作時請佩戴手套和護目鏡，避免接觸皮膚或粘膜。廢棄物請按照當?shù)匾?guī)定處理。

收貨后請立即儲存于2–8°C，切勿冷凍。緩沖液中已含0.1% BSA作為穩(wěn)定劑，但仍不建議冷凍，以免抗體聚集。如需長期保存，可分裝后存放于2–8°C，避免反復開啟。

IP實驗中，6 µg/mg裂解物為起始推薦量。eIF3B在常見細胞系（如HeLa、HEK293、U2OS）中表達豐度較高，可根據(jù)實際信號強度下調(diào)至4 µg/mg。若用于組織裂解物，可能需要增加用量。

WB實驗中，eIF3B表觀分子量約110-116 kDa，建議使用8%或10% SDS-PAGE凝膠。轉(zhuǎn)印推薦使用PVDF膜，濕轉(zhuǎn)100V 1.5小時通常足夠。

IHC實驗中，石蠟切片需充分脫蠟和水化。熱誘導抗原修復后，應讓切片自然冷卻至室溫（約20-30分鐘），以利抗原表位正確復性。建議設置陽性對照（如已知eIF3B高表達的組織，如肝臟或腫瘤組織）。