產(chǎn)品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的ATR抗體（貨號A300-138A）是一種兔源多克隆抗體，特異性靶向人源ATR（Ataxia Telangiectasia and Rad3-related）蛋白，即絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶ATR。該抗體以全IgG形式提供，濃度為1000 µg/ml，經(jīng)抗原親和純化，未偶聯(lián)標記物，適用于免疫沉淀（IP）和Western Blot（WB）檢測。

免疫原與特異性

本抗體的免疫原對應人源ATR蛋白第1675至1725位氨基酸殘基之間的區(qū)域，參考序列號為NP_001175.1（GeneID 545）。通過表位特異性親和純化工藝，將針對ATR固定化表位的抗體從抗血清中分離純化，確保高特異性識別目標抗原。

ATR屬于磷脂酰肌醇3激酶相關激酶（PIKK）家族，分子量約為300 kDa，本抗體識別的表位位于蛋白中段靠近C端的區(qū)域，能夠有效檢測全長ATR蛋白。

技術(shù)參數(shù)

參數(shù) | 詳細信息

靶標 | ATR (ATR serine/threonine kinase)

反應性 | 人

應用 | 免疫沉淀（IP）、Western Blot（WB）

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

免疫原 | 第1675–1725位氨基酸區(qū)間

同型 | IgG

偶聯(lián)物 | 未偶聯(lián)

純度 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人

濃度 | 1000 µg/ml

儲存條件 | 2–8 °C

保質(zhì)期 | 收貨后1年

緩沖液 | Tris-檸檬酸/磷酸緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊d化鈉

濃度測定方法

免疫球蛋白濃度采用比爾定律測定，其中1 mg/ml IgG在280 nm波長下的吸光度（A280）為1.4。

Western Blot實驗方案

推薦稀釋度

1:2,000 – 1:10,000

凝膠選擇

推薦使用3-8% Tris-醋酸凝膠。ATR蛋白分子量約300 kDa，在傳統(tǒng)Tris-甘氨酸凝膠中分離效果不佳。Tris-醋酸緩沖系統(tǒng)對高分子量蛋白的分離分辨率顯著提高，建議優(yōu)先采用。

實驗條件

封閉及稀釋液：5%脫脂牛奶-TBST

一抗孵育：過夜孵育（4°C）

二抗（細胞裂解液WB）：山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（貨號A120-101P）

二抗（免疫沉淀物WB）：使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體，并在封閉緩沖液中加入5%正常豬血清（貨號S100-020），以避免免疫沉淀洗脫物中IgG重鏈（約55 kDa）對目標信號產(chǎn)生干擾。

免疫沉淀實驗方案

推薦用量：6 µg抗體/mg細胞裂解物

裂解液建議：推薦使用RIPA緩沖液（含蛋白酶及磷酸酶抑制劑）裂解細胞，以充分釋放ATR并保留其磷酸化狀態(tài)。

捕獲基質(zhì)：使用Protein A瓊脂糖或磁珠（兔源抗體適用）。

孵育時間：抗體與裂解液4°C孵育2小時至過夜，后加入Protein A介質(zhì)繼續(xù)孵育1-2小時。

靶點背景信息

蛋白功能

ATR（ATM與Rad3相關蛋白）是PIKK家族的成員，與ATM緊密相關，作為DNA損傷的早期感受器發(fā)揮核心作用。ATR是一種絲氨酸/蘇氨酸激酶，主要響應紫外線（UV）損傷和DNA復制叉停滯信號。

ATR通過以下機制參與DNA損傷應答：

損傷感知：ATR與其結(jié)合伙伴ATRIP（ATR interacting protein）形成復合物，識別被復制蛋白A（RPA）包被的單鏈DNA區(qū)域。單鏈DNA是DNA復制脅迫和多種損傷的共同中間體。

底物磷酸化：在DNA損傷或復制壓力下，ATR磷酸化大量下游底物，包括：

BRCA1：參與同源重組修復和細胞周期檢查點調(diào)控。

p53：激活轉(zhuǎn)錄依賴性細胞周期阻滯和凋亡。

Chk1（文獻中Chk2也提及，但主要底物為Chk1）：介導細胞周期檢查點，抑制CDK活性。

Rad17：裝載PCNA-like檢查點復合物到損傷位點。

E2F轉(zhuǎn)錄因子1：調(diào)控細胞周期進程。

與染色質(zhì)重塑復合物的交互：ATR可能通過與Rad17及核小體重塑復合物的組分相互作用來感知DNA損傷。

別稱

ataxia telangiectasia and Rad3-related protein、FCTCS、FRAP-related protein 1 (FRP1)、MEC1、SCKL、SCKL1