一、產(chǎn)品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本品為兔源抗XRN1多克隆抗體（貨號(hào)：A300-443A），經(jīng)抗原親和純化制備，以未標(biāo)記的完整IgG形式提供。該抗體特異性識(shí)別人和小鼠來源的XRN1蛋白（5′→3′ 核糖核酸外切酶1），適用于免疫沉淀（IP）和蛋白質(zhì)印跡（WB）應(yīng)用，是研究細(xì)胞質(zhì)mRNA代謝、mRNP復(fù)合物功能以及骨肉瘤腫瘤抑制機(jī)制的重要工具。

二、核心產(chǎn)品參數(shù)

參數(shù)項(xiàng)目 | 具體規(guī)格

靶標(biāo)蛋白 | XRN1

反應(yīng)種屬 | 小鼠、人

宿主來源 | 兔

克隆類型 | 多克隆

抗體形式 | 完整IgG

免疫原區(qū)域 | 第1656位至C末端

抗體亞型 | IgG

標(biāo)記類型 | 未標(biāo)記

純化方式 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人

工作濃度 | 1000 µg/ml（1 mg/ml）

保存溫度 | 2 - 8 °C

有效期 | 自收貨之日起1年

緩沖體系 | Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊d化鈉

三、推薦應(yīng)用與實(shí)驗(yàn)條件

3.1 應(yīng)用稀釋度匯總

應(yīng)用技術(shù) | 推薦用量/稀釋度 | 備注

免疫沉淀（IP） | 6 µg / mg 裂解物 | 每毫克總蛋白使用6微克抗體

蛋白質(zhì)印跡（WB） | 1:2000 - 1:10,000 | 建議從1:2000起始優(yōu)化

3.2 蛋白質(zhì)印跡（WB）專用實(shí)驗(yàn)條件

通用條件：

封閉液及抗體稀釋液：5% 牛奶-TBST

一抗孵育方式：過夜孵育（不可縮短）

細(xì)胞裂解物Western Blot：

推薦二抗：山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（貨號(hào)A120-101P）

免疫沉淀產(chǎn)物的Western Blot：

推薦二抗：抗兔IgG輕鏈HRP標(biāo)記抗體

封閉液補(bǔ)充：需添加5%正常豬血清（貨號(hào)S100-020）

*重要提示：使用輕鏈特異性二抗可避免免疫沉淀實(shí)驗(yàn)中抗體重鏈（約55 kDa）的交叉檢測(cè)干擾。XRN1分子量約為220 kDa，與重鏈信號(hào)距離較遠(yuǎn)，但采用此標(biāo)準(zhǔn)仍有助于獲得最佳信噪比。

四、生產(chǎn)與純化工藝

4.1 親和純化

采用固定于固相載體上的XRN1特異性表位進(jìn)行親和層析純化，確?？贵w針對(duì)C末端區(qū)域具有高特異性和親和力。

4.2 濃度測(cè)定

免疫球蛋白濃度采用比爾定律（Beer’s Law）測(cè)定，計(jì)算依據(jù)為：1 mg/ml IgG溶液在280 nm波長處的吸光度值為1.4。本產(chǎn)品濃度為1000 µg/ml（1 mg/ml），屬于高濃度抗體，適合需要高靈敏度的IP實(shí)驗(yàn)。

五、儲(chǔ)存與穩(wěn)定性

推薦儲(chǔ)存條件：2°C至8°C冷藏，切勿冷凍（冷凍會(huì)導(dǎo)致蛋白變性及抗體活性喪失）

有效期：自收貨之日起1年

緩沖液成分：Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊d化鈉作為防腐劑

pH范圍：7–8的寬泛pH范圍提供了良好的緩沖穩(wěn)定性

運(yùn)輸建議：冷藏運(yùn)輸，避免反復(fù)溫度波動(dòng)

別名信息：

5′-3′ exoribonuclease 1；SEP1；strand-exchange protein 1 homolog

*注釋：“SEP1"源于酵母同源物鏈交換蛋白1的命名；“Dhm2"為小鼠同源物的名稱。*

六、使用注意事項(xiàng)

1. 疊d化鈉警示：緩沖液含0.09%疊d化鈉，該化合物具毒性，操作時(shí)請(qǐng)佩戴手套和護(hù)目鏡，避免接觸皮膚或吸入氣溶膠。

2. 高濃度特性：本抗體濃度為1000 µg/ml（1 mg/ml），屬于高濃度制劑。進(jìn)行IP實(shí)驗(yàn)時(shí)按6 µg/mg裂解物用量吸取少量即可，建議使用低吸附吸頭以提高移液準(zhǔn)確性。

3. IP用量計(jì)算：推薦用量為6 µg抗體/mg總蛋白裂解物。示例：若細(xì)胞裂解物總蛋白為2 mg，則需加入12 µg抗體（即12 µl，因濃度為1 µg/µl）。

4. 二抗選擇：

檢測(cè)細(xì)胞裂解物WB時(shí)，可使用識(shí)別重鏈和輕鏈的二抗（如A120-101P）

檢測(cè)IP產(chǎn)物WB時(shí)，建議使用抗兔IgG輕鏈HRP標(biāo)記抗體，并添加5%正常豬血清以降低非特異性背景。XRN1分子量較大（約220 kDa），與抗體重鏈（約55 kDa）無重疊，但使用輕鏈特異性二抗可消除潛在的降解產(chǎn)物干擾。

5. 過夜孵育要求：WB實(shí)驗(yàn)中一抗需過夜孵育（建議4°C緩慢搖動(dòng)），請(qǐng)勿縮短至室溫1–2小時(shí)。XRN1分子量大且豐度相對(duì)較低，過夜孵育對(duì)獲得清晰信號(hào)至關(guān)重要。

6. 反應(yīng)種屬確認(rèn)：本經(jīng)驗(yàn)證可識(shí)別人和小鼠XRN1。對(duì)于大鼠等其他物種，建議通過序列比對(duì)評(píng)估交叉反應(yīng)可能性，并進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

7. 陽性對(duì)照推薦：建議使用HeLa、HEK293T或小鼠NIH/3T3細(xì)胞裂解物作為陽性對(duì)照。XRN1在這些細(xì)胞系中普遍表達(dá)，預(yù)期在220 kDa附近檢測(cè)到特異性條帶。

8. 酶活性相關(guān)注意事項(xiàng)：XRN1是一種RNA降解酶，在制備細(xì)胞裂解物時(shí)應(yīng)注意使用RNase抑制劑，以防止內(nèi)源性XRN1在實(shí)驗(yàn)過程中降解RNA并可能影響其與其他蛋白的相互作用。

*本說明書基于產(chǎn)品特性研究編寫，使用者應(yīng)結(jié)合具體實(shí)驗(yàn)體系進(jìn)行優(yōu)化驗(yàn)證。