一、產品概述

IgA是一種以二聚體形式存在并通過J鏈連接的免疫球蛋白，主要分布于機體的黏膜表面，包括腸道、呼吸系統(tǒng)、眼睛以及初乳中。根據存在形式，IgA可分為分泌型IgA（存在于黏膜區(qū)域）和血清型IgA（存在于血清中）。在免疫學檢測中，特異性識別IgA重鏈的標記抗體是研究黏膜免疫、抗體應答及IgA相關疾病的關鍵工具。

本文介紹的艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的產品為HRP（辣根過氧化物酶）標記的山羊抗小鼠IgA重鏈多克隆抗體（貨號：A90-103P），經親和純化及固相吸附處理以確保類特異性。該抗體適用于酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）、免疫細胞化學（ICC）、免疫組化（IHC）及免疫印跡（WB）等多種檢測平臺。

二、核心規(guī)格參數

參數 | 詳細信息

靶標 | 小鼠IgA重鏈

反應性 | 小鼠

應用 | ELISA, ICC, IHC, WB

宿主 | 山羊

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

同型 | IgG

標記 | HRP（辣根過氧化物酶）

純度 | 抗原親和純化

抗原物種 | 小鼠

濃度 | 1 mg/ml

儲存條件 | 2 - 8 °C

保質期 | 收貨后1年

緩沖液 | 磷酸鹽緩沖液（PBS），含0.2% BSA及0.05% Pro-Clean 400

三、免疫原與特異性

生產與純化工藝

本抗體通過以下步驟制備：首先使用小鼠IgA免疫山羊，收集抗血清。為確保類特異性，抗血清經過固相吸附處理，去除與其他免疫球蛋白（IgM、IgG亞類、IgE）交叉反應的抗體。隨后，通過親和層析法進行純化：將小鼠IgA抗原偶聯(lián)至瓊脂糖珠，從抗血清中特異性捕獲識別IgA重鏈的抗體。純化后的抗體與辣根過氧化物酶（HRP）進行化學交聯(lián)偶聯(lián)，酶/抗體蛋白的摩爾比為4:1。

特異性驗證

經免疫電泳和ELISA驗證，本抗體特異性識別小鼠IgA重鏈。與以下小鼠免疫球蛋白及亞類的交叉反應率小于1%：

小鼠IgM

小鼠IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c、IgG3

小鼠IgE

這一高特異性確保了在復雜樣本（如血清、培養(yǎng)上清、組織裂解液）中能夠準確檢測IgA，避免因非特異性結合導致的假陽性或背景過高。

四、重要注意事項

某些雜交瘤細胞克隆可能表達異常的免疫球蛋白相關肽段，這些肽段可能被本抗體錯誤識別。在檢測雜交瘤培養(yǎng)上清中的IgA時，建議同時設置適當的陰性對照（如親本骨髓瘤細胞上清）以排除假陽性。

五、HRP標記與濃度測定

標記特征

本抗體為HRP直接偶聯(lián)物，無需再使用二抗孵育步驟，簡化了實驗流程，減少了非特異性背景。HRP具有高催化活性，可與多種底物（如TMB、DAB、ECL）反應產生可檢測信號，適用于比色、化學發(fā)光等多種檢測模式。

濃度測定

標記前的免疫球蛋白濃度采用比爾定律測定。標準條件下，1 mg/mL IgG在280 nm波長處的吸光度（A280）為1.4。本抗體濃度為1 mg/ml（即1000 µg/ml）。HRP偶聯(lián)后，抗體濃度仍以IgG質量計為1 mg/ml。

酶/抗體比例

本產品中HRP與抗體的摩爾比為4:1。這一比例在保證高信號強度的同時，避免了過度標記導致的抗體親和力下降，實現了靈敏度與特異性的平衡。

六、應用與實驗條件

重要提示

并非所有列出的應用均已在本實驗室經過具體測試。用戶需根據自身實驗體系進行優(yōu)化和驗證。以下推薦條件基于產品說明及行業(yè)通用經驗。

推薦稀釋比例

應用 | 推薦稀釋比例 | 說明

ELISA | 1:10,000 - 1:100,000 | 作為檢測抗體，建議從1:20,000開始優(yōu)化

免疫細胞化學（ICC） | 1:200 - 1:2,000 | 用于細胞爬片或培養(yǎng)細胞的IgA染色

免疫組化（IHC） | 1:200 - 1:2,000 | 適用于冷凍切片或FFPE組織切片

免疫印跡（WB） | 1:2,000 - 1:20,000 | 檢測還原或非還原條件下的IgA重鏈

七、產品使用與儲存

儲存注意事項

抗體應儲存于2 - 8°C，請勿冷凍。反復凍融會導致HRP活性喪失及抗體聚集。本抗體以液體形式提供，緩沖液為PBS，含0.2% BSA作為穩(wěn)定蛋白，以及0.05% Pro-Clean 400作為防腐劑（替代疊d化鈉，因疊氮化物會抑制HRP活性）。

穩(wěn)定性與保質期

自收貨之日起，在推薦的儲存條件下保質期為1年。避免光照和高溫。建議分裝為單次使用量（如10 µl/管）儲存于2-8°C，避免反復開蓋引入污染。

HRP標記抗體的特殊注意事項

避免疊氮化物：HRP酶活性受疊d化鈉抑制。實驗體系中不得使用含疊d化鈉的緩沖液。本抗體已使用Pro-Clean 400替代疊d化鈉，用戶自備的洗滌液、封閉液等亦需注意。

避光保存：HRP偶聯(lián)物對光敏感，應避免長時間暴露于強光下。

顯色底物：使用新鮮配制的底物溶液，確保顯色反應的一致性和靈敏度。