一、產(chǎn)品概述

MAD2（mitotic arrest deficient 2，有絲分裂阻滯缺陷蛋白2）是紡錘體組裝檢查點(diǎn)的關(guān)鍵組分，負(fù)責(zé)確保在后期 onset 之前所有染色體正確排列在赤道板上。MAD2是MCC復(fù)合體（包含BubR1、Bub3、Cdc20和MAD2）的亞基之一，該復(fù)合體可抑制APC/C（后期促進(jìn)復(fù)合物/ cyclosome）。MAD2受MAD1調(diào)控。MAD2功能異?？蓪?dǎo)致染色體不穩(wěn)定性，與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)。

本文介紹的由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的兔抗MAD2抗體（親和純化）（貨號(hào)：A300-301A） 是一款針對(duì)人源MAD2蛋白的高特異性多克隆抗體，可識(shí)別人和小鼠MAD2，適用于免疫沉淀和免疫印跡應(yīng)用。

二、產(chǎn)品規(guī)格

參數(shù) | 詳細(xì)信息

靶標(biāo) | MAD2

反應(yīng)種屬 | 小鼠、人

應(yīng)用 | IP、WB

宿主 | 兔

克隆類型 | 多克隆

抗體形式 | 完整IgG

免疫原 | 位于第155位氨基酸至C末端之間的區(qū)域（具體映射至SwissProt Q13257編號(hào)下殘基150至C末端殘基205）

同種型 | IgG

偶聯(lián)物 | 未偶聯(lián)

純度 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人

濃度 | 1000 µg/mL（1 mg/mL）

儲(chǔ)存條件 | 2–8°C

保質(zhì)期 | 自收到之日起1年

緩沖液 | Tris-檸檬酸/磷酸緩沖液，pH 7–8，含0.09% 疊d化鈉

生產(chǎn)流程 | 使用固定在固相載體上的MAD2特異性表位進(jìn)行親和純化。免疫球蛋白濃度采用比爾定律測(cè)定（1 mg/mL IgG在A280下吸光度為1.4）

三、推薦應(yīng)用與實(shí)驗(yàn)條件

本抗體經(jīng)驗(yàn)證可用于免疫沉淀和免疫印跡兩種應(yīng)用類型。以下為推薦條件。

3.1 免疫印跡（Western Blot, WB）

推薦稀釋范圍：1:2,000 – 1:10,000

封閉及抗體稀釋液：5% 牛奶-TBST

一抗孵育條件：過夜孵育

二抗選擇：

檢測(cè)細(xì)胞裂解液：使用山羊抗兔IgG（重鏈+輕鏈）抗體（貨號(hào)A120-101P）

檢測(cè)免疫沉淀樣品：使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體，封閉緩沖液中需添加5%正常豬血清（貨號(hào)S100-020）

3.2 免疫沉淀（Immunoprecipitation, IP）

推薦用量：6 µg 抗體 / mg 細(xì)胞裂解物總蛋白

四、儲(chǔ)存與穩(wěn)定性

儲(chǔ)存溫度：2–8°C

有效期：自收到之日起1年內(nèi)，按照指示條件儲(chǔ)存可保持最佳性能

緩沖液成分：Tris-檸檬酸/磷酸緩沖液（pH 7–8），含0.09% 疊d化鈉作為防腐劑

重要提示：疊d化鈉會(huì)抑制過氧化物酶活性。若下游檢測(cè)采用HRP偶聯(lián)二抗及化學(xué)發(fā)光底物，建議在使用前通過脫鹽柱或透析去除疊d化鈉。若采用熒光檢測(cè)或非酶促檢測(cè)體系，則無(wú)需去除

避免反復(fù)凍融：建議分裝保存于2–8°C，避免冷凍（反復(fù)凍融可能導(dǎo)致抗體變性）

五、產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)總結(jié)

優(yōu)勢(shì) | 說(shuō)明

高濃度 | 1000 µg/mL（1 mg/mL），滿足大量免疫沉淀和多次實(shí)驗(yàn)需求

雙物種反應(yīng)性 | 同時(shí)識(shí)別人和小鼠MAD2，擴(kuò)展應(yīng)用范圍

親和純化 | 抗原特異性純化，低非特異性背景

明確表位區(qū)域 | 免疫原位于155–C端（150–205），便于驗(yàn)證和交叉反應(yīng)預(yù)測(cè)

含輕鏈特異性檢測(cè)建議 | 提供免疫沉淀后Western Blot的優(yōu)化方案，避免輕鏈干擾（MAD2分子量與輕鏈接近）

長(zhǎng)保質(zhì)期 | 2–8°C穩(wěn)定儲(chǔ)存1年

六、注意事項(xiàng)總結(jié)

1. MAD2分子量（~24 kDa）與兔IgG輕鏈（~25 kDa）接近：免疫沉淀后的Western Blot必須使用抗兔IgG輕鏈特異性二抗，否則輕鏈信號(hào)會(huì)嚴(yán)重遮擋目標(biāo)條帶。

2. 疊d化鈉干擾HRP檢測(cè)：使用前根據(jù)檢測(cè)體系決定是否去除。

3. 物種交叉反應(yīng)：已驗(yàn)證人、小鼠，其他物種需自行驗(yàn)證。

4. 儲(chǔ)存：2–8°C，不可冷凍。

七、結(jié)論

兔抗MAD2抗體（親和純化）是一款高濃度（1 mg/mL）、高特異性的多克隆抗體，適用于人和小鼠樣本中MAD2蛋白的免疫沉淀和免疫印跡檢測(cè)。其免疫原位于MAD2的C端區(qū)域（150–205），可有效識(shí)別全長(zhǎng)MAD2。特別值得注意的是，由于MAD2分子量與兔IgG輕鏈非常接近，產(chǎn)品說(shuō)明書中明確提供了免疫沉淀后Western Blot的優(yōu)化檢測(cè)方案（使用抗兔IgG輕鏈HRP抗體及正常豬血清），這一細(xì)節(jié)設(shè)計(jì)對(duì)于獲取可靠的IP-WB數(shù)據(jù)至關(guān)重要。該抗體是研究紡錘體組裝檢查點(diǎn)、染色體不穩(wěn)定性及腫瘤發(fā)生機(jī)制的有力工具。研究者可參考上述推薦條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)優(yōu)化，以獲得高質(zhì)量的檢測(cè)結(jié)果。