一、概述

循環(huán)游離RNA和外泌體RNA作為液體活檢的重要分析對象，在腫瘤早期篩查、產(chǎn)前診斷及多種疾病標志物發(fā)現(xiàn)中具有廣闊應(yīng)用前景。然而，血漿和血清樣本中RNA含量極低（多數(shù)片段短于1000 nt，其中miRNA僅約21 nt），且存在大量蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和PCR抑制物，對提取純化技術(shù)提出了高靈敏度、高純度和無偏倚的要求。

由艾美捷代理的Norgen Biotek公司推出的血漿/血清循環(huán)與外泌體RNA純化試劑盒（漿液系列）（貨號：42800）基于z利樹脂基質(zhì)，提供了一種快速、可靠、簡便的解決方案。該系列包括三種規(guī)格：基礎(chǔ)漿液規(guī)格（0.25–5 mL樣本）、高通量96孔板規(guī)格（適用于真空或離心處理）以及Maxi漿液規(guī)格（2–5 mL大體積樣本）。所有試劑盒均無需使用酚或氯仿，可無偏倚地分離包括microRNA在內(nèi)的全部RNA片段，洗脫體積靈活可調(diào)，純化產(chǎn)物可直接用于小RNA測序等下游應(yīng)用。

二、產(chǎn)品特性與優(yōu)勢

1. 全面覆蓋各類RNA分子

該試劑盒能夠分離所有尺寸的循環(huán)RNA和外泌體RNA，包括：

長鏈RNA（<1000 nt）

短鏈RNA（如microRNA，約21 nt）

外泌體包裹的RNA

無論RNA的GC含量或大小差異，均能實現(xiàn)無偏倚的結(jié)合與洗脫，確保下游定量和分析結(jié)果的真實性。

2. 樣本體積靈活，濃縮效率高

支持血漿或血清樣本體積范圍：

基礎(chǔ)漿液規(guī)格：0.25 mL – 5 mL

96孔板規(guī)格：適配高通量自動化或手動操作

Maxi漿液規(guī)格：2 mL – 5 mL

通過優(yōu)化洗脫體積，可將微量RNA濃縮至小體積（通常10–50 uL），顯著提高檢測靈敏度。

3. 無抑制劑殘留，下游兼容性強

純化后的RNA被洗脫至與多種下游應(yīng)用兼容的溶液中，包括：

PCR及實時熒光定量PCR（qPCR）

甲基化敏感性逆轉(zhuǎn)錄qPCR

逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）

Northern blotting

RNase保護分析及引物延伸

表達芯片分析

二代測序（包括小RNA測序）

該試劑盒可有效去除樣本中的PCR抑制劑（如血紅素、免疫球蛋白、肝素等），無需額外純化步驟。

4. 專有樹脂基質(zhì)與漿液格式優(yōu)勢

純化基于Norgen的專有樹脂基質(zhì)。與傳統(tǒng)離心柱或磁珠法相比，漿液格式具有獨特優(yōu)勢：

無需延長管：對于大體積樣本（如5 mL），漿液格式可直接在標準離心管或管組中操作，無需使用特殊的延長管或轉(zhuǎn)接器。

操作靈活：既可采用離心法，也可配合真空 manifold 處理96孔板。

無酚/氯仿：全程不使用有機溶劑，安全環(huán)保。

5. 樣本類型與抗凝劑要求

適用樣本：新鮮或凍存的血漿、血清。

抗凝劑：僅限EDTA或枸櫞酸鈉處理的血液樣本制備的血漿。嚴禁使用肝素抗凝的血漿，因為肝素會嚴重干擾RT-PCR等多種下游應(yīng)用。

兼容采血管：與Streck Cell-Free RNA BCT®管兼容，可在常溫下穩(wěn)定樣本中的游離RNA。

三、產(chǎn)品規(guī)格與選型指南

產(chǎn)品規(guī)格 | 樣本體積范圍 | 通量 | 操作方式 | 適用場景

血漿/血清循環(huán)和外泌體RNA純化試劑盒（基礎(chǔ)漿液） | 0.25 – 5 mL | 單次或少量樣本 | 離心 | 常規(guī)科研、預(yù)實驗、小規(guī)模臨床研究

96孔板純化試劑盒（高通量漿液） | 適配96孔板 | 高通量（96個樣本/板） | 真空 manifold 或離心 | 大規(guī)模篩選、隊列研究、自動化平臺

Maxi漿液純化試劑盒 | 2 – 5 mL | 單次大體積 | 離心 | 樣本量充足、需要高產(chǎn)量RNA的研究

選擇建議：

當樣本體積>5 mL或需要處理大量樣本時，推薦使用96孔板格式。

若需從2–5 mL血漿/血清中獲得最大RNA產(chǎn)量，選擇Maxi規(guī)格。

常規(guī)0.25–2 mL樣本，基礎(chǔ)漿液規(guī)格即可滿足需求。

四、儲存條件與穩(wěn)定性

儲存溫度：所有溶液應(yīng)緊密密封，室溫（15–25℃）儲存。

有效期：自運輸之日起，試劑盒穩(wěn)定期為2年。

沉淀處理：若任何溶液出現(xiàn)鹽沉淀，使用前于60℃加熱20分鐘并充分混勻。請注意，漿液C2中含有灰色樹脂，加熱后不會溶解，此為正常現(xiàn)象。

五、下游應(yīng)用示例

小RNA測序：從1 mL血漿中提取的RNA可直接用于文庫構(gòu)建，檢測循環(huán)miRNA的表達譜。

腫瘤標志物檢測：定量分析血漿中特定mRNA或miRNA的水平，用于癌癥早期診斷或治療監(jiān)測。

產(chǎn)前診斷：檢測孕婦血清中胎兒來源的游離RNA（如PLAC4、RASSF1A等），用于非侵入性產(chǎn)前篩查。

外泌體研究：結(jié)合外泌體分離后，分析外泌體攜帶的RNA在細胞間通訊中的作用。

六、產(chǎn)品圖示

圖：不同體積血漿中循環(huán)RNA的分離與檢測。使用Norgen的血漿/血清循環(huán)RNA純化試劑盒（小型漿液規(guī)格），從0.5 mL、1 mL和2 mL血漿中分離循環(huán)RNA。取3 uL純化后的RNA作為模板，進行RT-qPCR反應(yīng)，檢測人5S基因。在所有血漿樣本體積中均檢測到5S看家基因。5S rRNA的擴增結(jié)果顯示，隨著樣本輸入體積的增加，RNA量也隨之增加，這表現(xiàn)為Ct值隨樣本體積增大而降低。從0.5 mL血漿中分離的RNA以紅線表示，從1 mL血漿中分離的RNA以綠線表示，從2 mL血漿中分離的RNA以藍線表示。黑線對應(yīng)無模板對照。