腸道屏障功能紊亂與多種疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，而Zonulin作為腸道緊密連接的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，已成為評估腸道通透性的重要生物標(biāo)志物。本文介紹的由艾美捷代理，Immundiagnostik推出的IDK Zonulin ELISA試劑盒（貨號：IDK-K 5600）是一種用于定量檢測人糞便樣本中Zonulin家族肽的體外診斷產(chǎn)品，可為臨床研究與疾病管理提供客觀的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

一、檢測靶點(diǎn)的生物學(xué)意義

Zonulin是一種人類蛋白質(zhì)，其結(jié)構(gòu)與霍亂弧菌的Zonula occludens毒素具有同源性，在腸道上皮細(xì)胞間緊密連接的調(diào)節(jié)中發(fā)揮核心作用。具體機(jī)制為：Zonulin與腸道上皮細(xì)胞表面的特異性受體結(jié)合，啟動一系列級聯(lián)生化反應(yīng)，誘導(dǎo)緊密連接開放，進(jìn)而增加腸道上皮的通透性。當(dāng)這一調(diào)控機(jī)制過度激活時，腸壁屏障功能減弱，大分子物質(zhì)得以穿過腸壁進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)，可能誘發(fā)或加重自身免疫反應(yīng)。

研究證實(shí)，在乳糜瀉和1型糖尿病患者中，Zonulin系統(tǒng)呈現(xiàn)過度活化狀態(tài)?；顒悠谌槊訛a患者的糞便Zonulin及其抗體水平顯著高于非乳糜瀉對照者或堅持無麩質(zhì)飲食的緩解期患者。近年來，腸道通透性增加（即“腸漏綜合征"）被認(rèn)為與代謝綜合征、肥胖、多種自身免疫性疾病、炎癥性疾病及腫瘤發(fā)生密切相關(guān)，在多發(fā)性硬化、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、哮喘和炎癥性腸病中亦扮演重要角色。

二、 試劑盒技術(shù)原理

本試劑盒采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）原理，所使用的多克隆抗體基于Wang（Journal of Cell Science, 2000）和di Pierro（Journal of Biological Chemistry, 2001）所報道的Zonulin序列開發(fā)。通過檢測糞便樣本中的Zonulin家族肽，其測定值與胰島素抵抗、肥胖等已確立的腸道通透性相關(guān)代謝特征具有良好的相關(guān)性，這一點(diǎn)已得到多項發(fā)表研究的證實(shí)。

三、檢測流程與操作要點(diǎn)

1、樣本與試劑準(zhǔn)備

檢測前，所有試劑和樣本必須平衡至室溫（15–30℃），并充分混勻。建議在試驗(yàn)記錄表上預(yù)先標(biāo)注標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品及樣本的孔位。從試劑盒中取出所需數(shù)量的微孔板條，未使用的板條應(yīng)立即連同干燥劑密封于鋁箔袋中，于2–8℃儲存至有效期。

2、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品與樣本處理

取標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品或糞便提取液各150 l，分別加入相應(yīng)標(biāo)記的離心管中，再加入150 l示蹤物（Tracer），充分渦旋混勻后，盡快用于檢測。**建議所有測定均設(shè)復(fù)孔**，以確保結(jié)果的可靠性。

3、關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)材料要求

為確保檢測質(zhì)量，需使用符合ISO 3696標(biāo)準(zhǔn)的一級純化水，該水質(zhì)應(yīng)不含未溶解物、膠體離子及有機(jī)分子，顆粒物小于0.2 m，在25℃時電導(dǎo)率≤0.055 S/cm（對應(yīng)電阻率≥18.2 MΩ·cm）。其他b備設(shè)備包括精密移液器及一次性吸頭、微孔板封板膜、微孔板振蕩器、多通道移液器、渦旋混勻器、聚丙烯材質(zhì)的試管或一次性容器，以及配備適當(dāng)濾光片的微孔板酶標(biāo)儀。

四、質(zhì)量控制與注意事項

本試劑盒僅用于體外診斷。操作時應(yīng)嚴(yán)格遵循試劑盒說明書中的孵育時間、溫度及洗滌程序。未用完的微孔板條必須嚴(yán)格密封保存，以防受潮失效。不同批號試劑組分不可混用。糞便樣本的采集與提取應(yīng)按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行，避免反復(fù)凍融。

五、臨床應(yīng)用價值

糞便Zonulin檢測為臨床提供了一種w創(chuàng)、便捷的腸道屏障功能評估手段。對于疑似腸漏綜合征相關(guān)疾病（如自身免疫病、代謝性疾病、功能性胃腸病）的患者，檢測結(jié)果可作為輔助診斷、病情監(jiān)測及療效評估的參考指標(biāo)。例如，在乳糜瀉患者中，Zonulin水平可反映疾病活動度及對無麩質(zhì)飲食的依從性；在炎癥性腸病患者中，其水平變化與腸道炎癥活動程度相關(guān)。