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透析袋已成為生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室簡(jiǎn)便常用的分離純化技術(shù)之一
閱讀：5310 發(fā)布時(shí)間：2020-4-29自Thomas Graham 1861年發(fā)明透析方法至今已有一百多年。透析已成為生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室簡(jiǎn)便常用的分離純化技術(shù)之一。在生物大分子的制備過程中，除鹽、除少量有機(jī)溶劑、除去生物小分子雜質(zhì)和濃縮樣品等都要用到透析的技術(shù)。
透析的動(dòng)力是擴(kuò)散壓，擴(kuò)散壓是由橫跨膜兩邊的濃度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度，正比于欲透析的小分子溶質(zhì)在膜內(nèi)外兩邊的濃度梯度，還正比于膜的面積和溫度，通常是4℃透析，升高溫度可加快透析速度。
透析膜可用動(dòng)物膜和玻璃紙等，但用的多的還是用纖維素制成的透析膜，目前常用的是美國Union Carbide （聯(lián)合碳化物公司）和美國光譜醫(yī)學(xué)公司生產(chǎn)的各種尺寸的透析管，截留分子量MwCO（即留在透析袋內(nèi)的生物大分子的小分子量，縮寫為MwCO）通常為1萬左右。
商品透析袋制成管狀，其扁平寬度為23 mm～50 mm不等。為防干裂，出廠時(shí)都用10％的甘油處理過，并含有極微量的硫化物、重金屬和一些具有紫外吸收的雜質(zhì)，它們對(duì)蛋白質(zhì)和其它生物活性物質(zhì)有害，用前必須除去?？上扔?0％乙醇煮沸1小時(shí)，再依次用50％乙醇、0.01 mol/L碳酸氫鈉和0.001 mol/L EDTA溶液洗滌，后用蒸餾水沖洗即可使用。實(shí)驗(yàn)證明，50％乙醇處理對(duì)除去具有紫外吸收的雜質(zhì)特別有效。使用后的透析袋洗凈后可存于4℃蒸餾水中，若長(zhǎng)時(shí)間不用，可加少量NaN2，以防長(zhǎng)菌。洗凈涼干的透析袋彎折時(shí)易裂口，用時(shí)必須仔細(xì)檢查，不漏時(shí)方可重復(fù)使用。
新透析袋如不作如上的特殊處理，則可用沸水煮五至十分鐘，再用蒸餾水洗凈，即可使用。使用時(shí)，一端用橡皮筋或線繩扎緊，也可以使用特制的透析袋夾夾緊，由另一端灌滿水，用手指稍加壓，檢查不漏，方可裝入待透析液，通常要留三分之一至一半的空間，以防透析過程中，透析的小分子量較大時(shí)，袋外的水和緩沖液過量進(jìn)入袋內(nèi)將袋漲破。含鹽量很高的蛋白質(zhì)溶液透析過夜時(shí)，體積增加50％是正常的。為了加快透析速度，除多次更換透析液外，還可使用磁子攪拌。透析的容器要大一些，可以使用大燒杯、大量筒和塑料桶。小量體積溶液的透析，可在袋內(nèi)放一截兩頭燒園的玻璃棒或兩端封口的玻璃管，以使透析袋沉入液面以下。
檢查透析效果的方法是：用1％ BaCl2檢查(NH4)2SO4，用1％ AgNO3 檢查NaCl、KCl等。
為了提高透析效率，還可以使用各種透析裝置。使用者也可以自行設(shè)計(jì)與制作各種簡(jiǎn)易的透析裝置。美國生物醫(yī)學(xué)公司（Biomed Instruments Inc.）生產(chǎn)的各種型號(hào)的Zeineh 透析器，由于使用對(duì)流透析的原理，使透析速度和效率大大提高
透析袋使用前如何處理
透析袋的使用前處理：
1. 把透析袋剪成適當(dāng)長(zhǎng)度（10-20cm）的小段。
2. 在大體積的2%(W/V)碳酸氫鈉和 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中將透析袋煮沸10分鐘。
3. 用蒸餾水*清洗透析袋。
4. 放在 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中將之煮沸10分鐘。
5. 冷卻后，存放于4度，必須確保透析袋始終浸沒在溶液內(nèi)。從此時(shí)起取用透析袋是必須戴手套。
6. 用前在透析袋內(nèi)裝滿水然后排出，將之清洗干凈。
透析膜 (前處理方法如下)：
1. 戴手套把透析膜剪成適當(dāng)長(zhǎng)度，浸在蒸餾水中 15 min 泡軟。
2. 浸入 10 mM sodium bicarbonate 中，并加熱至 80℃，一邊攪拌至少 30 min。
3. 換到 10 mM Na2·EDTA 中浸泡 30 min，以新鮮的 EDTA 同樣方法處理三次。
4. 再用 80℃ 蒸餾水洗 30 min，然后換到 20% 酒精中，放在 4℃ 冰箱中保存。
一、截留分子量(MWCO)說明：
由于透析膜由海綿狀橫向耦合的聚合物材料構(gòu)成，截留性能間接的由孔徑等級(jí)即截留分子量(MWCO)表示，截留率90%的溶質(zhì)分子大小可更精確的表示膜的MWCO。然而，溶質(zhì)的滲透性亦取決于分子形狀、水合度、離子電荷與極性，我們推薦選擇膜的MWCO為欲截留物質(zhì)分子量的一半，兩倍于透過物質(zhì)的分子大小。
二、 透析袋膜材質(zhì)說明：
1、生物技術(shù)纖維素酯(CE)膜
生物學(xué)惰性和超純的生物技術(shù)CE膜提供廣泛的可選孔徑(9種)和尺寸，用于帶電荷分子的分離及大分子純化。3種尺寸中，生物技術(shù)CE膜對(duì)條件及溶劑要求較高。一般而言，CE膜能夠抗弱的或稀的酸堿溶液和輕微乙醇，MWCO只有輕微改變。直接與有機(jī)溶劑接觸會(huì)破壞CE膜。生物技術(shù)CE膜只能在pH2-9與4-37℃下使用。即用透析裝置中也可使用CE膜。
2、生物技術(shù)再生纖維素(RC)膜
生物技術(shù)RC膜通過再生過程制得，物理抗性與化學(xué)相容性得到改良，具有與生物技術(shù)CE膜一樣高純度與均一的MWCO。RC膜能夠與高濃度的弱酸堿、低濃度的強(qiáng)酸堿、大多數(shù)醇類及一些溫和的或低濃度有機(jī)會(huì)溶劑共用，直接與強(qiáng)極性或有機(jī)會(huì)溶劑接觸會(huì)破壞RC膜。生物技術(shù)RC膜能在pH2-12與4-60℃條件下使用。
3、標(biāo)準(zhǔn)等級(jí)再生纖維素RC膜：Spectra/Por 1-7
標(biāo)準(zhǔn)等級(jí)再生纖維素(RC)由從棉毛纖維提取的天然纖維素構(gòu)成，可廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室透析。這種透明、柔韌的膜孔徑均一且低廉、結(jié)實(shí)，非常適用于脫鹽、緩沖液置換、大分子純化及其他一般應(yīng)用。由于具有廣泛的化學(xué)相容性，標(biāo)準(zhǔn)RC膜能夠與稀強(qiáng)酸堿液、高濃度的弱酸和弱堿、大多數(shù)醇類及一些溫和的或低濃度有機(jī)溶劑(包括DMSO)共用，但與一些強(qiáng)有機(jī)溶劑接觸可能會(huì)破壞RC膜，標(biāo)準(zhǔn)RC膜能夠在pH2-12和4-121℃條件下使用。
三、 使用說明：
1、使用過程中請(qǐng)務(wù)必帶上無裂縫的手套，使用后請(qǐng)及時(shí)洗手！
2、濕型透析袋保存時(shí)必須浸泡在0.05%疊氮鈉防腐溶液中，失水后將不能使用！
3、美國美國光譜醫(yī)學(xué)公司生產(chǎn)的透析袋大部分是預(yù)處理過的，基本不含硫化物和重金屬離子，浸泡在0.05%疊氮鈉防腐溶液中，使用前只需用冷卻蒸餾水沖洗3次即可使用；若是干型的，是涂有甘油保護(hù)層，可在60℃左右的溫水中浸泡10分鐘后用冷卻蒸餾水沖洗3次即可使用。請(qǐng)勿將光譜醫(yī)學(xué)的透析袋放到沸水中煮沸或者放到有機(jī)溶劑中處理，以防損壞膜材質(zhì)！
4、使用時(shí)，一端用橡皮筋或線繩扎緊，推薦使用特制的透析袋夾子夾緊，由另一端灌滿水，用手指稍加壓，檢查不漏，方可裝入待透析液，通常要留三分之一至一半的空間，以防透析過程中，透析的小分子量較大時(shí)，袋外的水和緩沖液過量進(jìn)入袋內(nèi)將袋漲破。含鹽量很高的蛋白質(zhì)溶液透析過夜時(shí)，體積增加50％是正常的。為了加快透析速度，除多次更換透析液外，還可使用磁子攪拌。透析的容器要大一些，可以使用大燒杯、大量筒和塑料桶。小量體積溶液的透析，可在袋內(nèi)放一截兩頭燒園的玻璃棒或兩端封口的玻璃管，以使透析袋沉入液面以下。
一、透析的定義：
透析（dialysis）是指物質(zhì)穿過膜的選擇性擴(kuò)散過程。可用于分離分子量大小不同的溶質(zhì)，低于膜所截留閾值分子量的物質(zhì)可擴(kuò)散穿過膜，高于膜截留閾值分子量的物質(zhì)則被保留在半透膜的另一側(cè)。
二、透析袋：
透析只需要使用的半透膜即可完成。通常是將半透膜制成袋狀，就叫做透析袋。在生物大分子的制備過程中，除鹽、除少量有機(jī)溶劑、除去生物小分子雜質(zhì)和濃縮樣品等都要用到透析的技術(shù)。比如蛋白質(zhì)和DNA的脫鹽濃縮，納米材料的篩選，中藥成分萃取后有機(jī)溶劑的去處等。
三、透析方法
透析只需要使用的半透膜即可完成。通常是將半透膜制成袋狀，將生物大分子樣品溶液置入袋內(nèi)，將此透析袋浸入水或緩沖液中，樣品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋內(nèi)，而鹽和小分子物質(zhì)不斷擴(kuò)散透析到袋外，直到袋內(nèi)外兩邊的濃度達(dá)到平衡為止。保留在透析袋內(nèi)未透析出的樣品溶液稱為“保留液”，袋（膜）外的溶液稱為“滲出液”或“透析液”。通過多次更換透析液而去除鹽和小分子物質(zhì)
透析袋使用說明
透析即用半透膜（透析袋）將大分子蛋白質(zhì)分離出來。在生物大分子制備過程中除去鹽、少量有機(jī)溶劑、生物小分子雜質(zhì)和濃縮樣品，透析法簡(jiǎn)單。
技術(shù)指標(biāo)：MWCO（截留分子量），單位Diatoms。
透析時(shí)，小于MWCO的分子在透析膜二邊溶液濃度差產(chǎn)生的擴(kuò)散壓作用下透過滲透膜、其速度與濃度梯度、膜面積及溫度成正比。欲快速滲透可采用直徑較小的透析袋以增加膜面積。常用溫度：4℃，升溫、更換袋外透析液或用磁力攪拌器，均能提高透析速度。
使用須知
高精度即用型無須前處理，用蒸餾水沖洗即可使用。
注意：CE型材質(zhì)較硬（洗滌時(shí)小心破裂）。
1. 某些化學(xué)物質(zhì)會(huì)破壞透析袋微孔切不可逆轉(zhuǎn)。計(jì)有：
烴、鹵化烴、醇、酮、酯、胺、二氧雜環(huán)、等。
酸（甲乙酸、稀強(qiáng)酸如5%HCL），10%萘酚，
甲醇、乙醇：濃度小于5%時(shí)，透析袋功能在，而MWCO變化。
2. 蛋白質(zhì)吸附量，小于1μg/克（以透析袋干重計(jì)）。
正常使用PH值5-9。
極限使用PH值2-12。
3. 前處理：煮沸5分鐘后用蒸餾水60℃沖洗2分鐘，置于4℃蒸餾水中待用。長(zhǎng)期保存液：0.05%-1%疊氮鈉，1mMEDTA或50%甘油，溫度（4℃），使用前以蒸餾水洗凈。
4. 即用型透析袋無需前處理，使用前用蒸餾水沖凈即可。
5. 透析袋裝液時(shí)應(yīng)留1/3-1/2空間，以防透析過程中，袋外的水和緩沖液過量進(jìn)入袋內(nèi)將袋漲破（含鹽量高的蛋白質(zhì)溶液透析過ye時(shí)，體積增加50%系正常情況）。
6.使用時(shí)需帶手套
7.透析效果檢查用