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q exactive hf-x 測(cè)試蛋白具備什么條件
閱讀：129 發(fā)布時(shí)間：2026-4-29一、樣品類(lèi)型與用量
蛋白提取物：≥50–100 μg
細(xì)胞：≥1×10? 個(gè)
動(dòng)物組織：≥1–10 mg；植物組織：≥100 mg
體液（血清 / 血漿）：≥5 μL；腦脊液 / 尿液：≥10–50 μL
二、樣品質(zhì)量與純度
無(wú)去垢劑 / 高聚物：嚴(yán)禁 SDS、Tween、NP?40、PEG、甘油等（干擾離子化、污染色譜柱 / 離子源）。
無(wú)鹽 / 低電導(dǎo)：避免高濃度尿素、鹽酸胍、Tris、磷酸鹽、DTT、β?ME（鹽抑制電離、導(dǎo)致峰畸變）。
純度達(dá)標(biāo)：
膠內(nèi)酶解：SDS?PAGE 分離后考染可見(jiàn)清晰條帶，無(wú)雜帶污染。
溶液酶解：總蛋白純度 > 80%，無(wú)核酸 / 多糖 / 脂質(zhì)殘留。
無(wú)蛋白酶 / 磷酸酶污染：防止降解與修飾丟失。
三、酶解與肽段要求（Bottom?up）
酶解：用測(cè)序級(jí)胰蛋白酶（1:20–1:50，37℃，12–16 h），無(wú)自降解，肽段長(zhǎng)度7–20 aa。
脫鹽除雜：C18 柱脫鹽，去除未酶解蛋白、鹽、色素、脂質(zhì)。
濃度與體積：肽段濃度0.1–1 μg/μL，體積5–20 μL（自動(dòng)進(jìn)樣器適配）。
溶劑適配：溶解于0.1% 甲酸水溶液（或 5% 乙腈 + 0.1% 甲酸），避免純有機(jī)溶劑。
四、穩(wěn)定性與保存
新鮮制備：24 h 內(nèi)上機(jī)；短期（1–7 天）：4℃避光；長(zhǎng)期：?80℃分裝凍存（避免反復(fù)凍融）。
無(wú)沉淀 / 團(tuán)聚：肽段溶液澄清，無(wú)肉眼可見(jiàn)顆粒（堵塞色譜柱）。
五、Top?down（完整蛋白）額外要求
分子量：<150 kDa（抗體 / 融合蛋白可放寬）。
緩沖液：20–50 mM 乙酸銨（pH 6.5–7.5），無(wú)鹽、無(wú)去垢劑、無(wú)還原劑。
濃度：5–20 μM，體積10–50 μL。
六、常見(jiàn)拒收情況
含 SDS、Tween、PEG、甘油等去垢劑 / 高聚物。
高鹽（>50 mM）、高尿素（>2 M）、高 DTT（>1 mM）。
蛋白降解（條帶模糊、肽段峰雜亂）、酶解不。
樣品渾濁、有沉淀、顏色過(guò)深（色素干擾）。
濃度過(guò)低（<0.1 μg/μL）或體積不足（<5 μL）。
