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使用CSA技術的技巧
閱讀：1759 發(fā)布時間：2016-1-25
在使用CSA技術時，也應注意某些組織細胞內(nèi)內(nèi)源性過氧化物酶、內(nèi)源性生物素的干擾。內(nèi)源性過氧化物酶可用0.3%～3%H202抑制其活性。 在使用CSA技術時，也應注意某些組織細胞內(nèi)內(nèi)源性過氧化物酶、內(nèi)源性生物素的干擾。內(nèi)源性過氧化物酶可用0.3%～3%H202抑制其活性。
標記的雜交探針或抗體的非特異性結合，以及其他目標探針的非特異性結合放大，都可給實驗的分析帶來困難。因為CSA技術的顯著放大能力，對非特異性結合的信號也具有放大作用。
但因為CSA具有*的敏感性，因此抗體和核酸探針可稀釋到相當高的濃度，在目標物達到飽和所需的濃度以下，這樣非特異性背景染色將大大降低或消失，而且稀釋度的提高還可節(jié)約昂貴試劑的用量。
哺乳動物細胞和組織內(nèi)含有生物素依賴的羧基酶，它是許多功能代謝必需的。當使用生物素鏈霉親和素檢測系統(tǒng)時，這些含有生物素的酶產(chǎn)生很強的背景信號。在使用時應預先封閉組織細胞內(nèi)的內(nèi)源性生物素。
生物素化酪胺酰胺與HRP酶促反應后，加熱可改進CSA檢測敏感性。在孵育液中加入增加黏性的葡萄糖硫酸鹽、聚乙烯吡咯烷酮(poly-vinyl pyrrolidone，PVP)可降低苯氧基原子團中間體的擴散，使信號定位更為準確。也有文獻報道證明在使用標記的酪胺酰胺時，直接用HRP標記探針對于降低非特異性結合尤其有用。 北京富瑞恒創(chuàng)科技有限公司。