檢測(cè)原理與方法

試劑盒采用DTNB比色法(終點(diǎn)法)檢測(cè)還原型谷胱甘肽含量，其核心原理是基于DTNB(埃爾曼試劑)與還原型谷胱甘肽的巰基反應(yīng)生成黃色TNB發(fā)色團(tuán)，通過(guò)測(cè)定412nm處的吸光度實(shí)現(xiàn)定量分析。具體反應(yīng)過(guò)程如下：

1. 樣本處理：

? 組織樣本：按照組織質(zhì)量(g)：試劑一體積(mL)=1:5-10的比例進(jìn)行冰浴勻漿，8000g，4℃離心10分鐘，取上清液

? 細(xì)胞樣本：按照細(xì)胞數(shù)量(10^4個(gè))：試劑一體積(mL)=500-1000:1的比例進(jìn)行超聲破碎，8000g，4℃離心10分鐘，取上清液

? 液體樣本(血清、血漿等)：直接使用，無(wú)需勻漿處理

2. 反應(yīng)體系構(gòu)建：

? 在微量玻璃比色皿或96孔板中，依次加入20μL樣本上清液和140μL試劑二，混勻靜置

? 再加入40μL試劑三(DTNB)，混勻靜置2分鐘

? 在412nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值(A)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，計(jì)算樣本中GSH含量

3. 定量計(jì)算：

? GSH含量計(jì)算公式：GSH(μmol/L) = (A2 - A1)/斜率，其中A2為樣本吸光度，A1為空白對(duì)照吸光度，斜率為標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率

? 按蛋白濃度計(jì)算：GSH(μmol/mg prot) = (A2 - A1)/斜率 × V樣/V樣總 ÷ Cpr，其中Cpr為上清液蛋白質(zhì)濃度(mg/mL)

? 按樣本質(zhì)量計(jì)算：GSH(μmol/g鮮重) = (A2 - A1)/斜率 × V樣/V樣總 ÷ W，其中W為樣本質(zhì)量(g)

? 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算：GSH(μmol/10^6 cell) = (A2 - A1)/斜率 × V樣/V樣總 ÷ 細(xì)胞數(shù)量，其中細(xì)胞數(shù)量以10^6為單位計(jì)量

4. 檢測(cè)參數(shù)：

? 檢測(cè)方法：微量法/分光光度法

? 檢測(cè)波長(zhǎng)：412nm

?下限檢出限：3.763μg/mL

? 線性范圍：12.5-400μg/mL

? 適用樣本：組織、細(xì)胞、血清、血漿等

? 操作時(shí)間：約30分鐘(含樣本處理)

? 規(guī)格：100T/96S或200T/192S