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一、細胞簡介

細胞簡介

HuCC-T1是從肝內(nèi)膽管癌建立的人類膽管癌細胞系。膽管癌是一種高度侵襲性的惡性腫瘤，治療選擇有限，預(yù)后較差。HuCC-T1細胞已被廣泛用于研究膽管癌的病理生理學(xué)，并探索潛在的治療方法。該細胞系在研究各種藥物的效果方面特別有價值，包括他汀類藥物，這些藥物已被證明具有抑制膽管癌細胞增殖的潛力。在涉及HuCC-T1的研究中，觀察到他汀類藥物如匹伐他汀和顯著抑制細胞增殖，特別是當(dāng)與常規(guī)藥物如吉西他濱、和5-氟（5-FU）聯(lián)合使用時。這些藥物的聯(lián)合使用導(dǎo)致細胞生長的增強抑制，表明可能存在協(xié)同效應(yīng)。其作用機制涉及通過抑制MAPK/ERK信號通路誘導(dǎo)凋亡，表現(xiàn)為裂解的caspase-3水平增加和磷酸化的ERK（p-ERK）水平降低。這些發(fā)現(xiàn)表明他汀類藥物可能作為治療膽管癌的有前景的輔助療法，當(dāng)與現(xiàn)有的抗癌藥物聯(lián)合使用時可能改善預(yù)后。此外，HuCC-T1細胞系已被表征了多種分子標(biāo)志物，包括p53基因狀態(tài)，這在細胞周期調(diào)節(jié)和凋亡中起著關(guān)鍵作用。HuCC-T1中的確切p53突變狀態(tài)可以提供關(guān)于細胞系對DNA損傷劑響應(yīng)的見解，以及其總體腫瘤發(fā)生潛力。鑒于其分子特征，HuCC-T1繼續(xù)是膽管癌研究中的一個關(guān)鍵工具，提供了對疾病分子基礎(chǔ)的了解，并有助于開發(fā)新的治療策略。該細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因和嘌呤霉素抗性。HuCCT1-FLUC細胞puro藥篩濃度為1.0ug/ml，培養(yǎng)過程中建議使用0.5ug/ml濃度puro維持。

細胞名稱

HuCCT1-FLUC-PURO 人膽管癌細胞-FLUC-PURO

細胞別稱

HuCCT1-FLUC-PURO

細胞貨號

Delf-28931

來源

膽管癌組織

細胞形態(tài)

上皮樣細胞

生長特性

貼壁生長

培養(yǎng)條件

RPMI-1640 基礎(chǔ)培養(yǎng)基（貨號：Delf-16564）；優(yōu)質(zhì)胎牛血清+10%（貨號：Delf-11405）；

雙抗+1%（貨號：Delf-15487）。培養(yǎng)過程中建議使用0.5ug/mL濃度puro維持。

培養(yǎng)環(huán)境

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

二、細胞復(fù)蘇方法

復(fù)蘇步驟

1、將凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍；
2、加入到含4ml常規(guī)培養(yǎng)基（含10%FBS）的離心管中混合均勻；
3、在1000RPM條件下離心5min，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細胞；
4、將細胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的T25培養(yǎng)瓶（或6cm皿）中37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)；

三、細胞傳代方法

傳代比例

1:2（具體情況視細胞生長速度及密度決定）

傳代方法

1、盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；
2、用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1次，吸走潤洗的PBS；
3、加入0.25％（w/v）-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化2min左右（不同，消化時間不同，要根據(jù)細胞脫落情況，在進行終止消化）；
5、輕輕側(cè)拍T25培養(yǎng)瓶鏡下觀察，消化到細胞脫落在當(dāng)中后，加入2-3ml含10%FBS的常規(guī)培養(yǎng)基終止消化；
6、1000rpm離心5min，收集到15ml離心管中加2ml該細胞培養(yǎng)基，重懸細胞時，在離心管中輕輕吹打，把細胞混勻；
7、按1:2分配到新的T25培養(yǎng)瓶中，添加4-5ml培養(yǎng)基放回37℃培養(yǎng)箱；

注意事項

不同品牌差異大，請注意消化時間

四、細胞凍存方法

凍存液

推薦使用DELF無血清非程序細胞凍存液Delf-16090進行凍存細胞，快速，便捷。

凍存規(guī)格

按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

凍存方法

1、消化并離心收集細胞，計數(shù)，推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml（本公司是1個T25培養(yǎng)瓶長滿凍存1支凍存管）；
2、將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管；
3、將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存;

五、注意事項

注意事項

1、所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2、建議在復(fù)蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。

3、本產(chǎn)品于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。

細胞培養(yǎng)清除試劑