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HL-1小鼠心肌細(xì)胞培養(yǎng)體系：

細(xì)胞收貨后處理

復(fù)蘇細(xì)胞處理方法：培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運(yùn)輸細(xì)胞的最好辦法。收到細(xì)胞用75%酒精噴灑整個細(xì)胞瓶，嚴(yán)格無菌后將細(xì)胞瓶放置培養(yǎng)箱中靜置2-4小時以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。靜置后顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（最好40x,100x,200x各一張），前三天照片是重要售后依據(jù)，不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。

凍存細(xì)胞處理方法：收到細(xì)胞后，觀察泡沫箱中干冰是否有剩余，凍存管是否完好無損是否有解凍情況，若發(fā)現(xiàn)干冰汽化或凍存管有解凍破損現(xiàn)象，請及時拍照并與我們聯(lián)系。如果細(xì)胞簽收三天內(nèi)未與我們聯(lián)系，則默認(rèn)為收貨良好。復(fù)蘇di一管如有活性問題，請及時聯(lián)系我們，技術(shù)人員與您溝通指導(dǎo)后再復(fù)蘇第二管，未與我方聯(lián)系擅自復(fù)蘇第二管出現(xiàn)問題不予售后。（如需產(chǎn)品詳細(xì)信息可向客服免費(fèi)索?。?/span>

牛鼻甲骨細(xì)胞BT操作步驟

細(xì)胞傳代：如果未超過80%匯合度時，將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中，留5ml培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO₂孵箱培養(yǎng)；如果細(xì)胞密度超80%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

貼壁細(xì)胞步驟如下：

1) 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次；

2) 加1mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置培養(yǎng)箱中消化 1min ，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后，加6ml含10%血清的培養(yǎng)基終止消化；

3) 輕輕吹打細(xì)胞，脫落后吸出至離心管中，1000 rpm離心5-8min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻；

4) 按5-6mL每瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6 mL培養(yǎng)基的6cm培養(yǎng)皿中或者T25培養(yǎng)瓶中。

（即1個T25瓶傳代接種至2個T25瓶或者2個6cm的培養(yǎng)皿）

懸浮細(xì)胞傳代步驟如下：

1、半換液法

半換液處理，豎著培養(yǎng)瓶在培養(yǎng)箱靜置1小時左右，輕輕吸掉3ml左右培養(yǎng)基，然后補(bǔ)給3ml的培養(yǎng)基，如果培養(yǎng)基變色慢，可直接加500ul左右FBS，

傳代的時候可以直接補(bǔ)給5ml培養(yǎng)基  分兩個培養(yǎng)瓶培養(yǎng)，一般這樣傳代3次左右可以離心傳代一次，去掉死細(xì)胞。

2、離心換液法

如需分瓶可以將細(xì)胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml

按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

b、細(xì)胞凍存：

1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2、添加0.25%yi蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入5ml培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心 5min；

3、 棄上清，沉淀細(xì)胞加入1ml我司的無血清凍存液（貨號：C7001），混勻后加入凍存管中。

4、 將凍存細(xì)胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中，則需在-80℃冰箱中存放24小時以上再轉(zhuǎn)入液氮罐中。

C、細(xì)胞復(fù)蘇：

1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意佩戴防護(hù)面具），快速將其置入37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2、將凍存管中的細(xì)胞移至含5ml培養(yǎng)基的15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3、棄上清，沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸，接種至T25培養(yǎng)瓶，放于37℃,5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4、第二天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)

HL-1小鼠心肌細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)：有些細(xì)胞貼壁不牢，在運(yùn)輸過程中容易發(fā)生細(xì)胞脫落，這是正常現(xiàn)象。如脫離較多可將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對比培養(yǎng)），沉淀加入yi酶1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心，棄上清，加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個T25），補(bǔ)充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

上海雅吉生物專業(yè)提供細(xì)胞技術(shù)服務(wù)。細(xì)胞質(zhì)?；蛘T導(dǎo)表達(dá)，穩(wěn)定細(xì)胞株pool，單克隆穩(wěn)定細(xì)胞株篩選，藥篩基因去除，誘導(dǎo)性表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建，轉(zhuǎn)基因表達(dá)鑒定，包括：基因敲入/敲除，常規(guī)基因穩(wěn)轉(zhuǎn)、Luc1/2，誘導(dǎo)性表達(dá)，基因敲入/敲除，常規(guī)基因穩(wěn)轉(zhuǎn)、基因原位敲入/敲除，Cre轉(zhuǎn)染、單克隆篩選、藥篩基因去除鑒定等。更多細(xì)胞技術(shù)服務(wù)項(xiàng)目周期及報價咨詢銷售經(jīng)理