產(chǎn)品名稱:A431 A431細胞 細胞株
代號:A431
中文名稱:人皮膚鱗癌細胞
生長狀態(tài):貼壁生長|懸浮生長|半貼壁半懸浮生長
細胞形態(tài):上皮樣|成纖維樣|圓形|不規(guī)則
培養(yǎng)條件:DMEM|1640|MEM|IMDM+10% FBS
細胞規(guī)格:>5×100000cells/瓶.
特征特性:該細胞源自一位患有皮膚鱗狀細胞癌的85歲女性,是Giard DJ等人建立的一系列細胞株中的一株。該細胞在免疫抑制小鼠體內(nèi)可成瘤,在瓊脂上培養(yǎng)可形成克隆;是一個超三倍體人細胞株。
傳代:1:3~1:8傳代;每2~3天換液1次。
庫存狀態(tài):現(xiàn)貨
運輸方式:運輸方式分為新鮮運輸和凍存管運輸兩種運輸方式
貨期:新鮮運輸需要1-2周,凍存管運輸?shù)男枰?/span>2-3天
慧穎細胞庫提供的所有細胞僅供科研使用
原代細胞的培養(yǎng)是指直接從機體取下細胞、組織和器官后立即進行培 養(yǎng);因此,較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養(yǎng),此時的細胞保持原有細胞的基本性質(zhì),如果是正常細胞,仍然保留二倍體數(shù)。不同的原代細胞傳代次數(shù)不同,具體需咨詢客服人員或者自行查閱 相關(guān)資料。
細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志的培 養(yǎng)細胞。從培養(yǎng)代數(shù)來講,理論上可培養(yǎng)到40-50代。
客戶應(yīng)具有一定細胞培養(yǎng)知識與經(jīng)驗,并具備基本培養(yǎng)條件(細胞培養(yǎng)實驗室,無菌操作臺、CO2培養(yǎng)箱,可拍照倒置顯微鏡等),并按說明書要求準(zhǔn)備好相應(yīng)的無菌的培養(yǎng)基、血清、雙抗、細胞培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板等。如果因客戶缺少基本培養(yǎng)經(jīng)驗和培養(yǎng)條件而導(dǎo)致細胞死亡或污染,不在我司售后責(zé)任之內(nèi)。
潔凈區(qū),并不是沒有細菌,而是細菌的數(shù)量非常少,國家標(biāo)準(zhǔn)100級的潔凈標(biāo)準(zhǔn)是浮游菌數(shù)不得超過5個每立方米,沉降菌數(shù)不得超過1個每培養(yǎng)皿.而國外的標(biāo)準(zhǔn)比我國的還要高一點,要求的數(shù)量更少。在我們的潔凈操作臺里,并不是真正一個細菌都沒有的,所以在操作的時候還是要盡量利索迅速地完成操作。盡量減少進入培養(yǎng)體系細菌的數(shù)量。 處理細菌污染的重要原則就是:無限地稀釋細菌的濃度,無限地減少細菌的數(shù)量! 1).將污染的培養(yǎng)液倒掉,轉(zhuǎn)燒瓶口,加入10mlPBS,適當(dāng)晃動清洗培養(yǎng)瓶,然后倒掉。轉(zhuǎn)燒瓶口。 2).繼續(xù)加入10mlPBS,同樣方法晃動,清洗培養(yǎng)瓶,然后倒掉。 3).繼續(xù)加入5mlPBS,同樣方法洗瓶,主要是培養(yǎng)面,然后倒掉。 4).重復(fù)步驟3再洗。 5).重復(fù)步驟3再洗。 6).加入3-5ml雙抗,洗瓶,靜置3-5分鐘,然后吸出。 7).加入3ml雙抗,洗瓶,靜置3-5分鐘,然后吸出。 8).再加入5mlPBS洗瓶,然后吸出。 9).加入10ml培養(yǎng)液,加入2ml雙抗,放置培養(yǎng)箱培養(yǎng),5小時之后,倒掉培養(yǎng)基,加入PBS洗瓶兩次,然后加入胰酶消化,吹打后置于離心機800-1000r/min離心,然后洗一次。置于新的培養(yǎng)瓶里培養(yǎng),培養(yǎng)體系加入2ml雙抗。 10).24h之后,視情況換液,若仍然污染嚴重,培養(yǎng)基渾濁,重復(fù)以上步驟,若看不到污染物,則繼續(xù)步驟1)、3)、4)、6)、8),然后加入培養(yǎng)液培養(yǎng),培養(yǎng)體系加入2ml雙抗. 11).24h之后,若仍污染嚴重,可再重復(fù)一次,若還污染只能棄之(不過一般沒有出現(xiàn)這種情況),若鏡下不見污染物,則換液PBS洗瓶,正常培養(yǎng)。 以上是對于細菌污染(常見為金黃色葡萄球菌和大腸桿菌);若為霉菌或者真菌污染,加入兩性霉素B清洗和培養(yǎng),終濃度一般為2.5μg/ml(在30μg/ml時會有細胞毒性)。另外也可以選擇在培養(yǎng)基里加3ug/ml的制霉菌素或放線菌素D。其它操作同;若為支原體或者黑膠蟲污染,基本上都是重新弄細胞了。對于黑膠蟲污染,我們會預(yù)防為主。基本上德國SERANA胎牛血清、GIBCO胎牛血清中不含黑膠蟲,我們建議購買!以上方法主要是針對貼壁生長A431 A431細胞 細胞株,在操作的過程中,一定要小心操作動作,輕柔緩慢,切忌大動作魯莽。防止細胞脫落。
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:張昕
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